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摘 要：以罗汉果（Siraitia grosvenorii）优良株系的幼嫩茎段作为试验材料，经过消毒处理后，剪成带腋芽小段，探讨植物激素细胞分裂素6-BA（6-苄基嘌呤）与生长激素IAA（吲哚乙酸）不同浓度配比和细胞分裂素6-BA与生长激素NAA（萘乙酸）不同浓度配比对其愈伤组织诱导的影响，以建立罗汉果高效再生系统。结果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L琼脂为罗汉果愈伤组织最适宜的诱导培养基，诱导率达83.33%。
关键词：罗汉果；植物激素；愈伤组织；诱导率
中图分类号 S687.3 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-29-03
罗汉果（Siraitia grosvenorii）为多年生草质藤本宿茎植物，属葫芦科，其成熟果实具有清热、润肺止咳等功效，是我国特产的传统中药和广西特有的药用植物，原产于广西北部地区。罗汉果种苗主要采用块茎和压蔓进行无性繁殖，繁殖系数低。为了扩大罗汉果的繁殖，国内多家科研院所都在重点研究利用组培快繁方法作为罗汉果种苗繁育的主要手段[1-3]。
目前罗汉果茎段愈伤组织诱导所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分学者主要采用的是6-BA和IBA 2种激素组合来探究对罗汉果愈伤组织诱导与生长的影响，效果一般。使用6-BA和IBA 2种植物激素所诱导的愈伤组织很少，分化程度也比较低，从而影响了其成活率[4]。同样与IBA作为生长激素的IAA和NAA，在愈伤组织诱导中从6-BA和IAA 2种激素组合与6-BA和NAA 2种激素组合方面探究的比较少[5]。本试验通过研究植物激素对罗汉果茎段愈伤组织诱导和生长的影响，以探究出更好、更经济的罗汉果愈伤组织诱导的生长激素浓度配比，可以为进一步完善罗汉果的快繁体系提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料 试验所采集的罗汉果外植体来自衡阳市兴民农业有限公司罗汉果生产基地。
1.2 培养基 以MS为基础培养基，蔗糖3.0%、琼脂3.5g/L，pH5.8～6.0。
第一组：在MS基本培养基的基础上，添加不同浓度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。
第二组：在MS基本培养基的基础上，添加不同浓度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培养基配制后都经121℃高压灭菌30min后待用。
1.3 培养条件 接种好的培养瓶放在恒温培养箱中进行培养，培养的温度为（25±1）℃，暗培养一星期后，光培养每天光照12h/d，光照强度2 000lx[6]。
1.4 方法 取健壮且无病虫害嫩梢，直接拿回实验室，用自来水冲洗干净后，再冲洗60min。再用75%的酒精进行消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒6～8min，然后用无菌水冲洗4次以上，沥干水分。将灭菌好的茎段切成1cm左右带腋芽的小段，形态学上端朝上，形态学下端朝下，顶部尽量刚好与培养基表面接触，盖好瓶盖。及时放入光照培养箱中进行培养。
2 结果
2.1 6-BA和IAA不同浓度配比对罗汉果愈伤组织诱导和生长的影响 将处理好的罗汉果茎段接入第一组1～9号不同浓度培养基的处理中，4周左右后形成黄白色愈伤组织，且长势良好，并记录数据。
如表1所示，9种培养基均能诱导出不定芽，但不同浓度植物激素组合对其诱导率有很大影响，由于植物激素生理作用的双重性，当IAA一定时，随着6-BA的浓度增大，诱导率首先逐渐上升，在浓度为1.0mg/L时达到最大，随后又逐渐下降，且变化趋势较大。而当6-BA浓度一定时，随着IAA浓度的增大，诱导率首先逐渐上升，在浓度为0.05mg/L时达到最大，随后又逐渐下降，且变化趋势不大。这也验证了分裂素比生长激素对罗汉果愈伤组织诱导的影响大。通过图1可知：以5号处理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的组合诱导率最高，达66.67%。
3 讨论
罗汉果外植体愈伤组织诱导成功与否，除了要选择正确的基本培养基和适合于组培苗生长的光照时间和光照强度、培养温度及湿度以外，最主要的影响因素还在于选用适宜的激素种类和浓度配比。外植体的脱分化、再分化过程，试管苗根、茎、叶等器官的发生，往往都需要向培养基中添加植物激素或生长调节剂。对激素种类和浓度的筛选始终是组培工作的重点和难点。
植物生长激素在离体组织愈伤组织诱导方法中对植物的生长发育表现出双重作用：一般生长素在低浓度时可以促进生长，浓度较高则会抑制生长，如果浓度更高则会使植物受伤，其发挥的生理作用会因浓度、植物的种类、器官、细胞的年龄不同而有差异。而细胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促进细胞的分裂，而又主要是对细胞质的分裂起作用，所以，细胞分裂素促进细胞分裂的效应只有在生长素存在的前提下才能表现出来。
对于不同激素在罗汉果离体组织诱导的影响有很多的研究，例如：宋鹏飞、唐国兴等利用罗汉果离体叶片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培养基中诱导愈伤组织[7]；林荣、王秀琴等采用罗汉果离体茎段在MS+6-
BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培养基中诱导愈伤组织[8]；黄春梅、曾黎辉等采用罗汉果叶片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+
2，4-D 0.5mg/L培养基中诱导愈伤组织，但诱导率都比较低且诱导时间较长[9]；付长亮、马小军等采用罗汉果离体茎段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基中诱导愈伤组织，并发现对罗汉果茎段增值系数影响最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本试验也验证了这一规律：6-BA对罗汉果愈伤组织诱导的影响比IAA或NAA要大。
参考文献
[1]付长亮，马小军，白隆华，等.罗汉果组织培养研究进展[J].中国中药杂志，2005，30（5）： 325-328.
[2]吴金寿，刘月学，赖钟雄，等.应用生物技术发展罗汉果产业化的探讨[J].厦门大学学报（自然科学版），2001，40 （增刊2）： 220-224.
[3]李典鹏，张厚瑞.广西特产植物罗汉果的研究与应用[J].广西植物，2000，20（3）： 270-276.
[4]李代丽，康向阳.植物愈伤组织培养中内外源激素效应的研究现状与展望[J].生物技术通讯，2007，18（3）： 546-548.
[5]郎多勇，张新惠，孙志国.外援激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响[J].时珍国医国药，2012，23（10）： 2 463-2 465.
[6]颜吕敬.植物组织培养手册[M].上海： 上海科学技术出版社，1990.
[7]宋鹏飞，唐兴国，周全，等.罗汉果叶片离体再生快繁技术[J].武汉生物工程学院学报，2010，6（1）： 16-19.
[8]林荣，王秀琴，王润珍，等.罗汉果茎段离体培养研究[J].广西植物，1985，5（3）： 273-277.
[9]黄春梅，曾黎辉，吴金寿，等.罗汉果叶片培养及其不定芽形成的细胞学观察[J].吉林农业大学学报，2005，27（6）： 639-642.
[10]付长亮，马小军，白隆华，等.罗汉果脱毒苗的快速繁殖研究[J].中草药，2005，36（8）： 1 225-1 229. （责编：施婷婷）
关键词：罗汉果；植物激素；愈伤组织；诱导率
中图分类号 S687.3 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-29-03
罗汉果（Siraitia grosvenorii）为多年生草质藤本宿茎植物，属葫芦科，其成熟果实具有清热、润肺止咳等功效，是我国特产的传统中药和广西特有的药用植物，原产于广西北部地区。罗汉果种苗主要采用块茎和压蔓进行无性繁殖，繁殖系数低。为了扩大罗汉果的繁殖，国内多家科研院所都在重点研究利用组培快繁方法作为罗汉果种苗繁育的主要手段[1-3]。
目前罗汉果茎段愈伤组织诱导所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分学者主要采用的是6-BA和IBA 2种激素组合来探究对罗汉果愈伤组织诱导与生长的影响，效果一般。使用6-BA和IBA 2种植物激素所诱导的愈伤组织很少，分化程度也比较低，从而影响了其成活率[4]。同样与IBA作为生长激素的IAA和NAA，在愈伤组织诱导中从6-BA和IAA 2种激素组合与6-BA和NAA 2种激素组合方面探究的比较少[5]。本试验通过研究植物激素对罗汉果茎段愈伤组织诱导和生长的影响，以探究出更好、更经济的罗汉果愈伤组织诱导的生长激素浓度配比，可以为进一步完善罗汉果的快繁体系提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料 试验所采集的罗汉果外植体来自衡阳市兴民农业有限公司罗汉果生产基地。
1.2 培养基 以MS为基础培养基，蔗糖3.0%、琼脂3.5g/L，pH5.8～6.0。
第一组：在MS基本培养基的基础上，添加不同浓度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。
第二组：在MS基本培养基的基础上，添加不同浓度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培养基配制后都经121℃高压灭菌30min后待用。
1.3 培养条件 接种好的培养瓶放在恒温培养箱中进行培养，培养的温度为（25±1）℃，暗培养一星期后，光培养每天光照12h/d，光照强度2 000lx[6]。
1.4 方法 取健壮且无病虫害嫩梢，直接拿回实验室，用自来水冲洗干净后，再冲洗60min。再用75%的酒精进行消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒6～8min，然后用无菌水冲洗4次以上，沥干水分。将灭菌好的茎段切成1cm左右带腋芽的小段，形态学上端朝上，形态学下端朝下，顶部尽量刚好与培养基表面接触，盖好瓶盖。及时放入光照培养箱中进行培养。
2 结果
2.1 6-BA和IAA不同浓度配比对罗汉果愈伤组织诱导和生长的影响 将处理好的罗汉果茎段接入第一组1～9号不同浓度培养基的处理中，4周左右后形成黄白色愈伤组织，且长势良好，并记录数据。
如表1所示，9种培养基均能诱导出不定芽，但不同浓度植物激素组合对其诱导率有很大影响，由于植物激素生理作用的双重性，当IAA一定时，随着6-BA的浓度增大，诱导率首先逐渐上升，在浓度为1.0mg/L时达到最大，随后又逐渐下降，且变化趋势较大。而当6-BA浓度一定时，随着IAA浓度的增大，诱导率首先逐渐上升，在浓度为0.05mg/L时达到最大，随后又逐渐下降，且变化趋势不大。这也验证了分裂素比生长激素对罗汉果愈伤组织诱导的影响大。通过图1可知：以5号处理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的组合诱导率最高，达66.67%。
3 讨论
罗汉果外植体愈伤组织诱导成功与否，除了要选择正确的基本培养基和适合于组培苗生长的光照时间和光照强度、培养温度及湿度以外，最主要的影响因素还在于选用适宜的激素种类和浓度配比。外植体的脱分化、再分化过程，试管苗根、茎、叶等器官的发生，往往都需要向培养基中添加植物激素或生长调节剂。对激素种类和浓度的筛选始终是组培工作的重点和难点。
植物生长激素在离体组织愈伤组织诱导方法中对植物的生长发育表现出双重作用：一般生长素在低浓度时可以促进生长，浓度较高则会抑制生长，如果浓度更高则会使植物受伤，其发挥的生理作用会因浓度、植物的种类、器官、细胞的年龄不同而有差异。而细胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促进细胞的分裂，而又主要是对细胞质的分裂起作用，所以，细胞分裂素促进细胞分裂的效应只有在生长素存在的前提下才能表现出来。
对于不同激素在罗汉果离体组织诱导的影响有很多的研究，例如：宋鹏飞、唐国兴等利用罗汉果离体叶片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培养基中诱导愈伤组织[7]；林荣、王秀琴等采用罗汉果离体茎段在MS+6-
BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培养基中诱导愈伤组织[8]；黄春梅、曾黎辉等采用罗汉果叶片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+
2，4-D 0.5mg/L培养基中诱导愈伤组织，但诱导率都比较低且诱导时间较长[9]；付长亮、马小军等采用罗汉果离体茎段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基中诱导愈伤组织，并发现对罗汉果茎段增值系数影响最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本试验也验证了这一规律：6-BA对罗汉果愈伤组织诱导的影响比IAA或NAA要大。
参考文献
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[4]李代丽，康向阳.植物愈伤组织培养中内外源激素效应的研究现状与展望[J].生物技术通讯，2007，18（3）： 546-548.
[5]郎多勇，张新惠，孙志国.外援激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响[J].时珍国医国药，2012，23（10）： 2 463-2 465.
[6]颜吕敬.植物组织培养手册[M].上海： 上海科学技术出版社，1990.
[7]宋鹏飞，唐兴国，周全，等.罗汉果叶片离体再生快繁技术[J].武汉生物工程学院学报，2010，6（1）： 16-19.
[8]林荣，王秀琴，王润珍，等.罗汉果茎段离体培养研究[J].广西植物，1985，5（3）： 273-277.
[9]黄春梅，曾黎辉，吴金寿，等.罗汉果叶片培养及其不定芽形成的细胞学观察[J].吉林农业大学学报，2005，27（6）： 639-642.
[10]付长亮，马小军，白隆华，等.罗汉果脱毒苗的快速繁殖研究[J].中草药，2005，36（8）： 1 225-1 229. （责编：施婷婷）