【摘 要】
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目的: 通过基因工程技术构建和表达抗人CD154人-鼠嵌合抗体Fab段.方法: 从分泌鼠抗人CD154单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株4F1中提取总RNA, 分别采用特异性引物扩增mAb VH 和V
【机 构】
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苏州大学生物技术研究所,苏州大学附属第一医院临床免疫学实验室
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目的: 通过基因工程技术构建和表达抗人CD154人-鼠嵌合抗体Fab段.方法: 从分泌鼠抗人CD154单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株4F1中提取总RNA, 分别采用特异性引物扩增mAb VH 和VL的DNA编码区基因.同时, 从人脾脏细胞中克隆出免疫球蛋白恒定区基因.利用基因重组技术构建嵌合Fab共表达载体pTXB1-Fab, 利用大肠杆菌表达简单, 高效, 成本低廉的特点, 对重组Fab进行原核表达.利用SDS-PAGE电泳、Western blot、流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI数据库BLAST显示, 克隆的基因序列符合小鼠Ig可变区特征.表达质粒pTXB1-Fab构建正确, 在大肠杆菌中实现可溶性表达.表达的人-鼠嵌合抗体与亲本抗体具有相同的识别位点. 结论: 成功地克隆获得阻断型抗人CD154 mAb(4F1)的轻链、重链可变区基因, 成功构建pTXB1-Fab共表达载体, 在大肠杆菌中实现可溶性表达, 为人源化抗体的制备奠定了技术基础.
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