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建立了牛尿中残留的雌二醇气相色谱-负化学电离质谱检测方法。尿样中加入乙酸缓冲溶液，酶水解过夜后，用甲醇-四丁基甲醚作为洗脱液，经固相萃取柱净化，五氟苯甲酰氯衍生化后，用气相色谱-质谱负化学源选择离子模式测定，同位素-β-雌二醇内标法定量。方法的回收率为76％～104％，定量限为0．25ng／mL，测定结果的相对标准偏差为2．9％～5．7％。