利用SMART技术构建鸡肺酵母双杂交cDNA文库

来源 :四川动物 | 被引量 : 0次 | 上传用户：popwoool20

【摘要】

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以1月龄SPF鸡肺为材料，用Trizol方法提取总RNA，并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA’mRNA，利用SMART技术合成双链eDNA（dseDNA）。合成的dseDNA通过CHROMASPINTM TE-400Column进行纯化，纯化

【作者】

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赵素君王红宁杨鑫张安云周英顺

【机构】

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四川大学生命科学学院,四川省畜牧科学研究院

【出处】

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四川动物

【发表日期】

：

2012年6期

【关键词】

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禽传染性支气管炎病毒鸡肺酵母双杂交 CDNA文库 SMART技术 IBV chicken lung yeast two-hybrid eDNA l

【基金项目】

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国家“863”计划,“家禽重要病毒病基因工程疫苗研究和创制”（2006AA10A205）

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以1月龄SPF鸡肺为材料，用Trizol方法提取总RNA，并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA’mRNA，利用SMART技术合成双链eDNA（dseDNA）。合成的dseDNA通过CHROMASPINTM TE-400Column进行纯化，纯化后的dseDNA与线性pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞AHl09中，以同源重组的方式，在酵母细胞内构建成鸡肺的eDNA文库。获得的文库容量为3．9×106 cfu，随机选取20个克隆进行PCR检测，插入片段大小集中在0．3—3．0kb之间，平均插入

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