【摘 要】
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应用GIBCOBRL建库试剂盒建立了正常人体淋巴细胞cDNA文库.取新鲜的正常人外周血,分离出淋巴细胞,进行体外培养,提取总RNA,纯化mRNA,并将其反转录成cDNA,与SalI和NotI接头连接
【机 构】
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新疆医科大学公共卫生学院,新疆农科院微生物所基因工程实验室,新疆精神卫生中心,新疆肿瘤研究所
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应用GIBCOBRL建库试剂盒建立了正常人体淋巴细胞cDNA文库.取新鲜的正常人外周血,分离出淋巴细胞,进行体外培养,提取总RNA,纯化mRNA,并将其反转录成cDNA,与SalI和NotI接头连接后插入λZipLox载体,体外包装后转染到Y1090宿主菌中,进行滴度测试及文库扩增.构建的正常人淋巴细胞cDNA文库含2.6×106重组子,克隆效率为5×1012重组子/g cDNA,插入片段长度约为1～5kb.扩增后的文库浓度为3×107重组子/μl,将文库稀释到10-6时所产生的噬菌斑密度最为适宜.试验结果表明,该库符合标准,所构建的正常人淋巴细胞cDNA文库为进一步筛选目的基因、制作基因芯片等提供了有效的工具.
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