【摘 要】
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将DNA染料EMA(Edthidium Monoazide Bromide叠氮溴化乙啶)和PMA(Propidium Monoazide Bromide叠氮溴化丙啶)与实时荧光定量PCR技术相结合,通过对曝光时间、染料浓度进行优化,
【机 构】
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上海师范大学生命与环境科学学院; 上海市质量监督检验技术研究院;
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将DNA染料EMA(Edthidium Monoazide Bromide叠氮溴化乙啶)和PMA(Propidium Monoazide Bromide叠氮溴化丙啶)与实时荧光定量PCR技术相结合,通过对曝光时间、染料浓度进行优化,验证EMA/PMA-qPCR技术对于肠炎沙门氏菌活/死菌鉴别方法的可行性;对比2种试剂的作用效果,确定最为适宜的预处理方式。结果表明,使用浓度为10μg/mL的EMA,曝光时间为15 min,可以完全抑制浓度为5×107 cfu/mL的热致死肠炎沙门氏菌的DNA扩增。对于相同浓度的菌悬液,PMA则无法保证与热致死菌DNA分子的有效交联,对于死菌扩增的抑制效果不理想。降低菌液浓度为5×106 cfu/mL,提高PMA的浓度对于活菌的DNA模板有损耗,对热致死菌的抑制效果无改善。EMA-qPCR方法能克服普通PCR无法区别活死菌的缺点,更适宜作为沙门氏菌检测的一种初筛方式。
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