Cry2A杀虫蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

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通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BarnHI双酶切定向插入到原核表达载体pET.30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转人大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达。将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目
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