副猪嗜血杆菌OMP5的克隆表达及其对豚鼠免疫保护作用

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根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(outer membrane protein P5,OMP5)基因序列设计1对特异性引物,以江西分离株NC0807基因组DNA为模板,扩增出OMP5基因.将其克隆到pEf-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-OMP5,质粒转化大肠杆菌BL21( DE3),通过SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况和反应原性.重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫豚鼠,测定其免疫原性和保护效率.结果表明,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达.表达的蛋白分子质量约为43 ku,能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别.动物试验结果表明,重组蛋白免疫后能诱导产生高水平的OMP5特异性抗体,并可显著保护豚鼠抵抗副猪嗜血杆菌强毒菌株的攻击,提示OMP5是副猪嗜血杆菌的保护性抗原.
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