【摘 要】
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目的:该研究拟通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法(PCR-RFLP)建立一种能快速鉴别当归药材及饮片中掺伪欧当归的方法.方法:通过比对当归和欧当归的核糖体DNA内转录间隔
【机 构】
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甘肃省药品检验研究院国家中药材及饮片质量控制重点实验室,甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室,兰州730000
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目的:该研究拟通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法(PCR-RFLP)建立一种能快速鉴别当归药材及饮片中掺伪欧当归的方法.方法:通过比对当归和欧当归的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点,选择欧当归的特异性酶切位点Fnu4H I,并设计PCR-RFLP反应引物,对影响PCR-RFLP反应的退火温度、引物浓度、循环数和酶切时间等条件进行优化,并对该方法的准确性进行了考察.另外,利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对掺伪不同比例和不同来源的当归掺伪样品进行了适用性考察.结果:建立了当归药材及饮片中掺伪欧当归的PCR-RFLP鉴别方法,在退火温度63℃,循环数为30时,掺有欧当归的当归样品经过特异性引物扩增后,能被Fnu4H I限制性内切酶酶切,在100～500 bp检出2条单一DNA条带,当归样品则无此条带.该方法对当归中掺入欧当归的检出限为3％,可用于日常当归中掺混欧当归的检测.结论:建立的PCR-RFLP鉴别方法能够灵敏、准确地检测当归药材及饮片中是否掺有欧当归,可为当归的质量控制提供检验依据,以保障其临床用药安全.
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