目的探讨不同月经周期的人子宫内膜细胞的纯化、培养方法的改进及细胞保存方法。方法将16例人正常子宫内膜组织(其中增生期和分泌期各8例)采用0.1%胶原酶消化及二次消化,100目及400目滤网分离,腺上皮细胞根据不同月经周期差时贴壁法提纯等方法进行分离、纯化,采用0.4μm孔径的共培小室与间质上皮细胞共培养。光镜观察细胞形态,免疫荧光细胞染色鉴定细胞纯度。P1代间质上皮细胞冻存3个月后复苏。结果 15例分离、培养成功。间质细胞及腺上皮细胞纯度均可达95%以上。共培养推迟了腺上皮细胞自发凋亡时间,间质细胞在体外可稳定传代且冻存复苏不影响其活力及纯度。结论采用胶原酶二次消化法和不同的时间段选择性贴壁法可高效率、高纯度的分离出子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞,间质上皮细胞可进行冻存复苏。