【摘 要】
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目的 建立检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)纯度的分子排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-
【机 构】
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兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室甘肃疫苗工程技术研究中心,甘肃兰州730046
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目的 建立检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)纯度的分子排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC),并对该方法进行验证.方法 使用Waters 515系列高效液相色谱仪,利用TSK G2000SWxL色谱柱检测E4F4的纯度,并从系统适应性、专属性、重复性和中间精密度进行验证,同时使用20、50、100 mmol/L磷酸盐缓冲液的流动相对样品进行了6次纯度检测.结果 空白溶剂在目标峰积分范围内无干扰峰;专属性验证表明样品与阴性对照分离度良好;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.49％,保留时间RSD为0.11％;中间精密度分析目标峰面积RSD为0.47％,保留时间RSD为0.48％;使用不同盐浓度(20～100 mmol/L PBS,pH 6.8)的流动相对样品进行6次纯度检测后,各样品纯度均大于99.0％,目标峰面积RSD为0.53％,保留时间RSD为0.76％.结论 经验证,建立的SEC-HPLC法各项指标均符合要求,可用于E4F4的纯度检测.
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