【摘 要】
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目的 构建重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354 bp及在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达hTSHR膜外区氨基酸314～418蛋白分子.方法 提取人正常甲状腺组织总RNA,反转录后进行聚合酶链反应(PCR
【机 构】
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300070,天津医科大学免疫学教研室;300070,天津医科大学病理生理学教研室;300070,天津医科大学代谢病医院内分泌学研究所卫生部重点实验室
【基金项目】
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天津市科技发展基金;国家自然科学基金
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目的 构建重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354 bp及在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达hTSHR膜外区氨基酸314～418蛋白分子.方法 提取人正常甲状腺组织总RNA,反转录后进行聚合酶链反应(PCR),将纯化的扩增产物hTSHR1043～1354 hp与表达载体pcDNA3.1连接后转化TOP10 E.coli感受态菌.经PCR、Hind Ⅲ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定插入序列和方向正确的重组质粒转染CHO细胞,并用Western blot方法鉴定表达的蛋白.结果 PCR扩增得到hTSHR膜外区C端312 bp的基因片段hTSHR1043～1354 bpo该片段与表达载体pcDNA3.1的连接后转化TOP10 E.coli感受态菌.重组质粒经PCR、Hind Ⅲ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR1043～1354 bp片段插入序列和方向正确.重组质粒转染的CHO细胞裂解液经Western blot可以检测出15 900的蛋白条带,与预期的蛋白相对分子质量相符.结论 成功构建了重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354 bp,其转染CHO细胞后表达15 9 000的目的蛋白(hTSHR氨基酸314～418蛋白片段).
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