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建立HIV-1 Tat依赖的MazF表达载体pcDNA3.1-GFP-HA-MazF-U3TAR系统。
方法分别扩增HIV-1 U3TAR和MazF基因片段，通过重叠PCR将U3TAR和MazF连接起来，并TA克隆到pMD18T载体中。通过PCR为MazF引入HA标签，获得U3TAR-MazF-HA。经过双酶切和连接反应，将U3TAR-MazF-HA反向插入到pcDNA3.1，获得pcDNA3.1-HA-MazF-U3TAR。将GFP基因正向插入到MazF基因之后，为该载体引入了荧光报道基因，获得pcDNA3.1-GFP-HA-MazF-U3TAR。
结果与pcDNA3.1-tat-flag的共转染实验证明，构建的MazF表达载体pcDNA3.1-GFP-HA-MazF-U3TAR是Tat依赖的。对比pcDNA3.1-GFP-HA-MazF-U3TAR单转染的细胞，共转染的细胞具有更少的绿色荧光信号，表明表达的MazF可以下调报道基因GFP的表达。
结论pcDNA3.1-GFP-HA-MazF-U3TAR的构建，为探索基于MazF的艾滋病基因治疗方案提供了载体工具。