【摘 要】
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为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎.根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物.收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA.经RT-PCR扩增牛β-防
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心,新疆农业大学动物医学学院
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为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎.根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物.收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA.经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109.在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序.结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189 bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基.用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同.结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础.
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