【摘 要】
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【目的】筛选衰老相关蛋白prelamin A的相互作用蛋白并验证其相互作用情况。【方法】通过酵母双杂交方法从人骨骼肌c DNA文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白。一对一回复性
【机 构】
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广东省中医院,临沂市人民医院检验科,
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【目的】筛选衰老相关蛋白prelamin A的相互作用蛋白并验证其相互作用情况。【方法】通过酵母双杂交方法从人骨骼肌c DNA文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白。一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting验证其在细胞外的相互作用,构建Ran BPM与绿色荧光蛋白融合表达载体p EGFP-N1-Ran BPM,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒p Ds Red1-N1-prelamin A.共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察细胞内的共定位情况。【结果】筛选得到包括Ran BPM在内的21个候选相互作用蛋白。一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting证明两者能在细胞外相互作用。激光共聚焦显微观察发现Ran BPM能与带红色荧光蛋白的prelamin A蛋白在核膜共定位。【结论】Ran BPM可能通过与Prelamin A发生相互作用参与了细胞衰老的过程。
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