【摘 要】
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目的探讨miRNA-192靶向调控Wilms肿瘤蛋白1(WT1)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法以人肾小球足细胞为研究对象，将细胞分为4组：空白对照组、高糖组、阴性对照组、miRNA-192抑制组。采用Western印迹检测各组足细胞表面标志蛋白肾病蛋白(nephrin)、WT1、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平；qRT-PCR检
【机 构】
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武汉市中心医院内分泌科 430000,武汉市中心医院内分泌科 430000,华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科，武汉 430000,
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目的探讨miRNA-192靶向调控Wilms肿瘤蛋白1(WT1)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。
方法以人肾小球足细胞为研究对象，将细胞分为4组：空白对照组、高糖组、阴性对照组、miRNA-192抑制组。采用Western印迹检测各组足细胞表面标志蛋白肾病蛋白(nephrin)、WT1、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平；qRT-PCR检测各组细胞miRNA-192、WT1、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平；采用双荧光素酶靶标实验验证miRNA-192与WT1基因的靶向关系。
结果与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组nephrin的蛋白表达水平显著降低，差异有统计学意义(F＝444.404，P<0.05)；miRNA-192相对表达量升高而WT1蛋白及mRNA表达水平均降低(F＝184.216、243.543、107.898，P均<0.05)；双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，WT1是miRNA-192的靶基因；与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高(FTGF-β1蛋白＝69.014，P<0.05；Fα-SMA蛋白＝87.644，P<0.05；FTGF-β1 mRNA＝147.714，Fα-SMA mRNA＝247.584，P<0.05)。与阴性对照组相比，miRNA-192抑制组nephrin的蛋白表达水平升高(t＝16.519，P<0.05)，miRNA-192相对表达量降低、WT1蛋白及mRNA表达水平升高(tmiRNA-192＝10.533，tWT1＝17.088、8.186，P均<0.05)；TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA蛋白表达水平均降低(tTGF-β1蛋白＝6.114，P<0.05；tα-SMA蛋白＝7.941，P<0.05；tTGF-β1 mRNA＝8.239，tα-SMA mRNA＝8.481，P均<0.05)。
结论miRNA-192靶向调控WT1促进糖尿病肾病的发展，其作用机制可能与足细胞EMT有关；抑制miRNA-192的表达可减轻高糖诱导的足细胞EMT。
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