pEGFP—BLCAP真核表达载体的构建和鉴定

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目的:构建真核表达载体pEGFP—BLCAP并转染骨肉瘤细胞SOSP—M。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP—M细胞中提取总RNA,经RT—PCR获得BLCAP基因的cDNA,测序正确后插入真核表达载体pEGFP—C2中。构建的重组质粒经脂质体介导转染SOSP—M细胞,经观察荧光蛋白表达和Western blot鉴定目的蛋白在转染后的SOSP—M细胞中的表达情况。结果:RT—PCR成功地扩增出一条约280bp的片段,经限制性内切酶分析和DNA序列测定证实目的基因cDNA已插入重组质粒;荧光显微镜下观察到
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