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[摘 要]目的：建立柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱为Agilent HC-C18（250mm×4.6mm ，5m）；柱温为30℃；流速为1.0mL·min-1；流动相为十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-甲醇（500∶500∶60，用磷酸调pH2.2）；检测波长为254nm。结果：柔红霉素保留时间19.7min，盐酸多柔比星保留时间10.9min，盐酸表柔比星保留时间12.4min；三种化合物进样量在0.12g范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；平均回收率为98.4%～99.0%，RSD为0.45%（n=5）；结论：本方法灵敏度高、准确，可以对盐酸多柔比星类化合物进行定性定量分析。
[关键词] 柔红霉素；盐酸多柔比星；盐酸表柔比星 比较
中图分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0391-01
柔红霉素和盐酸多柔比星为蒽环类抗生素，盐酸多柔比星是柔红霉素的C-14位的羟化产物，盐酸多柔比星氨基糖部分4’位异构化的活性相当、但毒性减少的盐酸表柔比星，是联合国世界卫生组织推荐的治疗肿瘤化疗的基本药物，在国际和国内市场同类药物中占有较大的份额。目前盐酸多柔比星类化合物主要是通过化学半合成法，问题是化学合成目标产物时可能含有其他的组份，质量控制需要各组份精确分析，因此定性和定量分析就很重要。2005版药典中有介绍盐酸多柔比星类化合物的分析方法，但没有柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星三种化合物的分析方法，故参照有关文献，以高效液相色谱法建立盐酸多柔比星类化合物的分析方法。
1 材料
1100型高效液相色谱仪包括包括G2170AA型PC化学工作站、G1311A型四元梯度泵、G1314A型可变紫外检测器（美国Agilent公司）；ALC-1100.4精密天平（Sarforius公司）；KQ250DB型数控超声波清洗器（昆山超声仪器厂）。柔红霉素（柔红霉素标准品，中国药品生物制品检定所，批号：130559～200501），盐酸多柔比星（Sigma公司，批号：038K1349），注射用盐酸表柔比星（盐酸表柔比星样品，浙江海正药业股份有限公司，批号：090803）；甲醇、乙腈为色谱级，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Agilent HC-C18 （250mm×4.6mm ，5μm）；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；流动相：十二烷基硫酸钠溶液（1.44g+0.68 mLH3PO4+H2O+500mL， 用磷酸调pH2.2）-乙腈-甲醇（500∶500∶60），检测波长254nm；进样体积20μL。结果，在此条件下柔红霉素与盐酸多柔比星、盐酸表柔比星色谱峰可基线分离，柔红霉素保留时间19.7min，盐酸多柔比星保留时间10.9min，盐酸表柔比星保留时间12.4min。该条件的建立为盐酸多柔比星类化合物进行定性分析奠定了基础。
2.2 样品溶液的制备：称取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg，用水溶解配置各自储存液1mg·mL-1即1μg·μL-1。
2.3 线性关系的考察：精密吸取样品溶液2.5、5、10、25、50、100μL，分别置于1.5 mL eppendorf管中，用流动相稀释至1mL，摇匀，精密吸取系列溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积的积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得到回归方程及线性范围，回归方程的建立为盐酸多柔比星类化合物的定量分析奠定基础。
2.4 最低检测限测定：将样品溶液逐步稀释，直至信噪比（S/ N） ≥3，此时的进样浓度即为检测限。以S/ N = 3 ：1 确定的柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星的最低检测浓度均为2.5μg·mL-1，检测限为50ng。
2.5 稳定性试验：取同一样品溶液，分别在0 、2 、4 、6 、8 、12 、24h测定峰面积。结果：柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD均<2.0%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.6 精密度试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg ，按“2.2”项下方法制备样品溶液，吸取20μL注入液相色谱仪，重复进样6次，按上述色谱条件测定峰面积。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD 均<2.0%，表明方法精密度良好。
2.7 重现性试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品，精密称取6份，每份约1mg，按“2.2”项下方法制备样品溶液，吸取20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星和表阿霉RSD均< 10.0%表明方法重现性良好。
2.8 加样回收率试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品5μg各5份，分别加入一定量的水溶解，用旋转蒸发仪40℃蒸馏浓缩，加500μL水洗出，按上述色谱条件测定峰面积，对照线性回归方程计算样品的回收率。
3 讨论
目前，采用HPLC法分别测定柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星文献报道较多，但采用同一个色谱条件来测定这3种化合物未见报道。本试验发现：Agilent HC-C18柱，柱温30℃，流速1.0mL·min-1，流动相SDS-乙腈-甲醇（500∶500∶60，用磷酸调pH2.2），检测波长254 nm，3種化合物分离效果很好。初步分析原因在于三种化合物的结构差异性：盐酸多柔比星比柔红霉素C-14位多了一个羟基，加大了盐酸多柔比星的极性，其保留时间要早于柔红霉素；盐酸表柔比星是盐酸多柔比星结构的异构化，保留时间肯定与盐酸多柔比星不一致。同时用磷酸调pH2.2使呈弱酸性能够提高柱效及分离度。本方法准确、灵敏度高、重现性好、可用于盐酸多柔比星类化合物的定性定量分析，盐酸多柔比星制剂的质量控制。
参考文献
[1] 石涛 陈莎莎 朱宇鹏 尚广东，柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的HPLC分析，论文网，2012.02
[关键词] 柔红霉素；盐酸多柔比星；盐酸表柔比星 比较
中图分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0391-01
柔红霉素和盐酸多柔比星为蒽环类抗生素，盐酸多柔比星是柔红霉素的C-14位的羟化产物，盐酸多柔比星氨基糖部分4’位异构化的活性相当、但毒性减少的盐酸表柔比星，是联合国世界卫生组织推荐的治疗肿瘤化疗的基本药物，在国际和国内市场同类药物中占有较大的份额。目前盐酸多柔比星类化合物主要是通过化学半合成法，问题是化学合成目标产物时可能含有其他的组份，质量控制需要各组份精确分析，因此定性和定量分析就很重要。2005版药典中有介绍盐酸多柔比星类化合物的分析方法，但没有柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星三种化合物的分析方法，故参照有关文献，以高效液相色谱法建立盐酸多柔比星类化合物的分析方法。
1 材料
1100型高效液相色谱仪包括包括G2170AA型PC化学工作站、G1311A型四元梯度泵、G1314A型可变紫外检测器（美国Agilent公司）；ALC-1100.4精密天平（Sarforius公司）；KQ250DB型数控超声波清洗器（昆山超声仪器厂）。柔红霉素（柔红霉素标准品，中国药品生物制品检定所，批号：130559～200501），盐酸多柔比星（Sigma公司，批号：038K1349），注射用盐酸表柔比星（盐酸表柔比星样品，浙江海正药业股份有限公司，批号：090803）；甲醇、乙腈为色谱级，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Agilent HC-C18 （250mm×4.6mm ，5μm）；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；流动相：十二烷基硫酸钠溶液（1.44g+0.68 mLH3PO4+H2O+500mL， 用磷酸调pH2.2）-乙腈-甲醇（500∶500∶60），检测波长254nm；进样体积20μL。结果，在此条件下柔红霉素与盐酸多柔比星、盐酸表柔比星色谱峰可基线分离，柔红霉素保留时间19.7min，盐酸多柔比星保留时间10.9min，盐酸表柔比星保留时间12.4min。该条件的建立为盐酸多柔比星类化合物进行定性分析奠定了基础。
2.2 样品溶液的制备：称取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg，用水溶解配置各自储存液1mg·mL-1即1μg·μL-1。
2.3 线性关系的考察：精密吸取样品溶液2.5、5、10、25、50、100μL，分别置于1.5 mL eppendorf管中，用流动相稀释至1mL，摇匀，精密吸取系列溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积的积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得到回归方程及线性范围，回归方程的建立为盐酸多柔比星类化合物的定量分析奠定基础。
2.4 最低检测限测定：将样品溶液逐步稀释，直至信噪比（S/ N） ≥3，此时的进样浓度即为检测限。以S/ N = 3 ：1 确定的柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星的最低检测浓度均为2.5μg·mL-1，检测限为50ng。
2.5 稳定性试验：取同一样品溶液，分别在0 、2 、4 、6 、8 、12 、24h测定峰面积。结果：柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD均<2.0%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.6 精密度试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg ，按“2.2”项下方法制备样品溶液，吸取20μL注入液相色谱仪，重复进样6次，按上述色谱条件测定峰面积。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD 均<2.0%，表明方法精密度良好。
2.7 重现性试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品，精密称取6份，每份约1mg，按“2.2”项下方法制备样品溶液，吸取20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星和表阿霉RSD均< 10.0%表明方法重现性良好。
2.8 加样回收率试验：取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品5μg各5份，分别加入一定量的水溶解，用旋转蒸发仪40℃蒸馏浓缩，加500μL水洗出，按上述色谱条件测定峰面积，对照线性回归方程计算样品的回收率。
3 讨论
目前，采用HPLC法分别测定柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星文献报道较多，但采用同一个色谱条件来测定这3种化合物未见报道。本试验发现：Agilent HC-C18柱，柱温30℃，流速1.0mL·min-1，流动相SDS-乙腈-甲醇（500∶500∶60，用磷酸调pH2.2），检测波长254 nm，3種化合物分离效果很好。初步分析原因在于三种化合物的结构差异性：盐酸多柔比星比柔红霉素C-14位多了一个羟基，加大了盐酸多柔比星的极性，其保留时间要早于柔红霉素；盐酸表柔比星是盐酸多柔比星结构的异构化，保留时间肯定与盐酸多柔比星不一致。同时用磷酸调pH2.2使呈弱酸性能够提高柱效及分离度。本方法准确、灵敏度高、重现性好、可用于盐酸多柔比星类化合物的定性定量分析，盐酸多柔比星制剂的质量控制。
参考文献
[1] 石涛 陈莎莎 朱宇鹏 尚广东，柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的HPLC分析，论文网，2012.02