【摘 要】
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[目的]旨在构建轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白1(NSP1)和3(NSP3)真核表达载体,并在人胚肾上皮HEK239T细胞中表达,随后研究轮状病毒NSP1和NSP3在体外初步影响IFN-β/ISRE报告基因活性.[方法]首先合成猿轮状病毒SA11株NSP1、NSP3编码基因连接到克隆载体pUCm-T上,通过PCR技术扩增目的片段,再以真核表达载体pRK-Flag、pRK-HA为骨架构建出可特异性表达重组蛋白pRK-Flag-NSP1/pRK-HA-NSP1、pRK-Flag-NSP3/pR
【机 构】
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西北民族大学生物医学研究中心,生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030;西北民族大学生物医学研究中心,甘肃省动物细胞技术创新中心,兰州 730030;西北民族大学生命科学与工程学院,兰州
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[目的]旨在构建轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白1(NSP1)和3(NSP3)真核表达载体,并在人胚肾上皮HEK239T细胞中表达,随后研究轮状病毒NSP1和NSP3在体外初步影响IFN-β/ISRE报告基因活性.[方法]首先合成猿轮状病毒SA11株NSP1、NSP3编码基因连接到克隆载体pUCm-T上,通过PCR技术扩增目的片段,再以真核表达载体pRK-Flag、pRK-HA为骨架构建出可特异性表达重组蛋白pRK-Flag-NSP1/pRK-HA-NSP1、pRK-Flag-NSP3/pRK-HA-NSP3的真核表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到HEK293T细胞中,通过Western blot鉴定NSP1/NSP3蛋白的表达.随后,将重组质粒pRK-Flag-NSP1/pRK-Flag-NSP3与IFN-β-Luc/ISRE-Luc质粒共转染至HEK239T细胞,经RIG-IN(RIG-I活化结构域)的刺激后利用双荧光素酶报告基因系统判定NSP1/NSP3蛋白对IFN-β/ISRE报告基因活性的影响.[结果]成功克隆了 NSP1和NSP3全长基因,构建了猿轮状病毒SA11株 NSP1、NSP3蛋白真核表达质粒 pRK-Flag-NSP1/pRK-HA-NSP1、pRK-Flag-NSP3/pRK-HA-NSP3,并在 HEK293T 细胞中转染表达,Western blot确定了 NSP1和NSP3蛋白成功表达.重组质粒pRK-Flag-NSP1和pRK-Flag-NSP3可显著降低RIG-IN诱导的双荧光素酶活性.[结论]NSP1和NSP3蛋白可抑制RIG-IN刺激的IFN-β和ISRE启动子活性,证明NSP3蛋白和已报道的NSP1蛋白一样具有抑制IFN-β信号通路的功能,为深入研究NSP3蛋白调控Ⅰ型干扰素信号通路的作用机制奠定理论基础.
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目的:观察彩超评估肝硬化结节?微小肝癌的意义?方法:分析我院2019年12月-2020年12月收治的49名肝硬化结节病例(A组)以及45名微小肝癌(B组)病例的资料，所有对象均经彩超扫描，记录检查结果?结果:(1)A组肝动脉直径?血流速率等与B组差异显著(P<0.05)?(2)彩超影像表现:①肝硬化结节:结节无规律变粗，伴有高回声，存在微小血管结构，未发现附近存在血流信号;②微小肝癌:结节数目少，且病灶直径小于2cm，以单发占比较高，大部分病例呈现低回声，边缘清晰，附近存在显著血流信号?结论:彩超可有效判
[目的]探究若尔盖高原湿地植物群落(乌拉苔草、木里苔草、花葶驴蹄草、藏嵩草)结构特征、土壤微生物群落多样性的长期变化特征及其二者之间的演化关系,为该地区的植被恢复和生态环境保护提供借鉴.[方法]结合室内样品分析,连续4 a(2016-2019年)观测了不同植物群落地上和地下各个指标的动态特征.[结果]①对于a多样性,2016-2019年若尔盖高原湿地植被Shannon-Wiener多样性指数、Margalef丰富度指数、Pielou均匀度指数呈一致的变化规律,均表现为:乌拉苔草＞木里苔草＞藏嵩草＞花葶驴蹄
[目的]探究烟草(Nicotiana tabacum L.)自然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance associated macrophage proteins,NRAMPs)在金属跨膜转运所起的作用.[方法]克隆NtNRAMP3.1基因,并对其序列和表达模式进行分析,同时通过酵母异源表达对其编码蛋白的Cd转运特性进行研究.[结果]烟草NtNRAMP3.1基因全长1542 bp,编码513个氨基酸残基的蛋白质.氨基酸序列比对和进化树分析发现,NtNRAMP3.1具有11个跨膜结构域
路基路面施工在公路工程中具有重要地位，若路基路面施工不具备科学性，必将导致工程整体建设质量降低，致使公路交通事业发展受到直接影响，在情况严重时，甚至将对行车安全构成威胁。因此为避免上述现象发生，保障行车安全，本文通过实际调查及分析文献资料，围绕公路工程路基适应性压实施工技术展开探讨，并对该项施工技术在公路工程中的应用进行研究，以期可以为施工人员进行施工作业提供可靠依据。
[目的]对紫金龙各营养器官的组织显微结构和组织化学定位进行研究,明确紫金龙各器官的组织构造特点和4种化学成分的分布积累特征.[方法]分别制作紫金龙根、茎和叶片的横切片,运用显微镜观察并分析各营养器官的组织结构,利用组织化学定位方法对黄酮、多糖、生物碱及皂苷等多类成分进行定位及分布特征分析.[结果]明确了紫金龙各器官的组织形态及构造特点;黄酮类成分主要分布在皮层基本薄壁组织、维管束、少数乳汁管及叶肉等组织细胞中.生物碱类成分主要分布在皮层基本薄壁组织、维管束及叶肉等组织细胞中.多糖及皂苷类成分则主要分布在皮
[目的]为解析不同马铃薯组织中糖苷生物碱的积累对人类使用及食品加工是否产生影响,研究不同储藏条件下马铃薯不同组织器官中的糖苷生物碱积累水平.[方法]用高效液相色谱—串联质谱法检测1-76和6-36(紫皮)、5-36和6-1(白皮)4种马铃薯资源在光照和地窖储藏60 d后块茎和芽2种组织中的糖苷生物碱含量变化情况;并利用实时荧光RCR对糖苷生物碱生物合成相关基因的表达量进行分析.[结果]糖苷生物碱检测显示:不同条件储藏后4种马铃薯芽中的糖苷生物碱含量显著高于块茎中的糖苷生物碱含量,马铃薯芽及马铃薯6-36(
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