【摘 要】
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[目的]克隆转录抑制因子Bmi-1基因并构建其正、反义真核表达载体,为研究其功能及其作用机制奠定基础。[方法]根据Bmi-1基因已知序列,设计合成一对引物,上下游引物分别加入XhoI和
【机 构】
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大连医科大学诊断学实验中心,大连医科大学检验医学院,大连市中心医院检验科
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[目的]克隆转录抑制因子Bmi-1基因并构建其正、反义真核表达载体,为研究其功能及其作用机制奠定基础。[方法]根据Bmi-1基因已知序列,设计合成一对引物,上下游引物分别加入XhoI和ClaI的酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法从人红白血病细胞株(K562)总RNA中扩增编码Bmi-1的基因片段(1017 bp),插入克隆载体pMD18-T,构建pMD18-Bmi-1载体,经限制性核酸内切酶谱证实后,再克隆至逆转录病毒载体pLNCX2中,构建pLNCX2-Bmi-1真核表达载体,并经测序证实。然
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