【摘 要】
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为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系，并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心（ATCC）引进贴壁培养型Vero细胞，通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞，扩增培养后液氮冻存，建立相应的细胞库；复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型等特性进行检定；通过Box-Behnken试验对生物反应器pH、溶氧和搅拌转速等3个培养参数进行优化，
【基金项目】
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甘肃省成果转化资助专项（17ZD4CA010）；
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为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系，并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心（ATCC）引进贴壁培养型Vero细胞，通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞，扩增培养后液氮冻存，建立相应的细胞库；复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型等特性进行检定；通过Box-Behnken试验对生物反应器pH、溶氧和搅拌转速等3个培养参数进行优化，确定最优培养参数。结果显示，筛选的Vero悬浮细胞形态呈圆形、饱满、透亮，大小均匀，呈现较好的悬浮生长状态；生长曲线呈S型；细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性；染色体数目为58或60的占75%;用响应面分析法得出的最优培养参数培养Vero细胞，细胞最高密度可达4.5×10~6 cells/mL。结果表明，成功筛选出了适应无血清悬浮培养的Vero细胞，通过优化培养参数，可在生物反应器中高密度生长。
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