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[摘要] 目的 了解绵阳市疑似肺结核患者的痰涂片和痰培养中结核分枝杆菌的阳性检出率情况。 方法 收集经胸片复查后疑似活动性肺结核患者的痰进行涂片和培养，并对检测出的结果进行比较分析。 结果 在747份痰直接涂片标本中，男性阳性率为0.67%，女性阳性率为0.27%，阳性检出率为0.94%，但差异无统计学意义（P>0.05）；而596份酸性罗氏培养基中，男性阳性率为3.85%，女性阳性率为0.34%，痰培养阳性检出率为4.19%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 绵阳市肺结核患病率低于全国，男性患病率高于女性。
[关键词] 肺结核；结核杆菌涂片；结核杆菌培养；阳性率
[中图分类号] R521 [文献标识码] C [文章编号] 2095-0616（2013）01-85-03
结核分支杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB），俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。结核分支杆菌可侵犯全身各器官，引起全身多系统多器官的疾病，但以肺结核最为多见。近年来，结核病死灰复燃，全球结核病疫情呈全球上升趋势，成为全球关注的公共卫生问题和社会问题。据统计，作为单一的传染病，结核病是造成死亡人数最多的传染病，已成为传染病在成年人中的首要死亡原因。全世界有1/3的人口感染或曾经感染过结核，因而结核病仍是全球的一个重要公共卫生问题[1]。中国结核患者数位居全球第二，仅次于印度[2]。2000年我国第四次结核病流行病学抽样调查报告显示，我国现有活动性肺结核患者451万，菌阳肺结核患者196万。而由于診断技术落后，全国约有50%的肺结核排菌患者未被发现，给人群造成巨大威胁。对结核病及时准确的诊断和治疗，是消除传染源、控制结核病流行的重要环节。“国家重大传染病防治综合示范区项目”在全国共建立了五个示范区，四川省绵阳市承担开展“乙肝与结核规模化现场流调及分级协同防治一体化示范研究”国家“十一五”科技重大专项课题。目前结核流调已完成了60万人的健康基线调查，其中发现2 800多名疑似患者。为进一步掌握肺结核患者流行病学特征，以便采取更有效的防治措施，笔者所在医院已对2011年经X胸片复核后提示有结核样病变的368名患者进行了调查，检测结果统计如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
标本采集方式：即时痰、夜间痰和清晨痰；标本采集时间：2011年11月20日～2012年6月20日；标本采集对象：绵阳市健康筛查，经X线胸片复核后提示有结核样病变经复核后仍未排除的疑似肺结核患者。共采集晨痰747份，其中男性有551份，女性有196份，年龄20～88岁，平均（55±35）岁。
1.2 方法
收集有持续2周以上的咳嗽、咳痰、痰中带血或咯血、低烧，胸部X线平片或CT显示肺部有病变的受检人员痰液3份：即时痰、夜间痰和清晨痰。即时痰为受检者在现场留置的痰标本，夜间痰为受检者在送痰前夜在家留置的痰标本，清晨痰为受检者在送痰当日清晨在家留置的痰标本。收到痰标本后，立即进行痰涂片检查和抗酸杆菌培养。痰涂片检查按《中国结核病防治规划——痰涂片镜检标准化操作及质量保证手则》[3]规定程序进行涂片镜检操作。痰培养按《中国结核防治规划——痰培养标准化操作及质量保证手册》规定程序进行操作，采用酸性罗氏培养基进行培养。
1.3 试剂与仪器
抗酸染液与酸性罗氏培养基（珠海贝索生物技术有限公司）、消化液（4%NaoH）、低速离心机（安徽中科佳科学有限公司）、5%CO2培养箱（日本三洋电机株式会）、生物安全柜（安徽航天生物科技有限公司）。
1.4 实验方法
1.4.1 直接痰涂片镜检方法 用竹签的一端挑取痰标本的脓样、干酪样部分约0.05～0.1 mL，置于清洁的载玻片中央处，均匀涂抹成2.5 cm×2.0 cm 的卵圆形痰膜。自然干燥，固定，抗酸染色后镜检。
1.4.2 改良罗氏培养法 首先进行标本处理：选择干酪样、脓性痰液标本，加入2倍量的4%NaOH处理液（黏稠标本适当增加处理液量），充分振荡，3 500 r/min低速离心机离心5 min，倾去上清液，将沉淀物混匀备用。然后接种：取上述沉淀物0.1 mL接种于酸性罗氏培养基斜面，置37℃恒温箱内培养。刚开始时，于第3天和第7天各观察1次，以后每周观察1次，有菌落生长者，经涂片抗酸染色确认后报告阳性，8周后未见菌落生长者为阴性。
1.5 统计学方法
采用SPSS11.0统计学软件分析，组间均数比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同性别阳性率对比
747份痰直接涂片标本中，男性阳性率为0.67%，女性阳性率为0.27%，但两者比较差异无统计学意义（x2=0.02，P>0.05）。见表1。596份酸性罗氏培养基中，男性阳性率为3.85%，女性阳性率为0.34%，差异有统计学意义（x2=4.53，P<0.05），说明男性发病高于女性。见表2。
2.2 两种方法比较结果
596份痰标本用两种方法进行抗酸检测，结果显示痰涂片阳性为4份，涂阳检出率为0.67%，而培养阳性为25份，培养阳性率为4.39%，痰培养阳性率是痰涂片阳性率的6倍多；对其进行配对计数资料的统计分析后，直接痰涂片与改良罗氏培养的检出率比较差异有统计学意义（x2=19.05，P<0.01）。见表3。
3 讨论
近年来，全球结核病疫情呈不断上升趋势，发病率和患者数分别以每年1.1%和2.4%的速度递增。2000年全国结核病流行病学调查结果显示活动性肺结核患者和涂阳肺结核患者的患病率分别是367/10万和122/10万；2011年3月21日全国第五次结核病流行病学调查计划及实施方案报道，2001～2010年，全国共发现和治疗肺结核患者828万例。其中，传染性肺结核患者450万例，传染性肺结核患者治愈率达到90%以上。15岁及以上人群肺结核的患病率由2000年的466/10万降至2010年的459/10万。目前我国有500万活动性肺结核患者，每年有13万患者死于该病，患者发现和治疗成功是结核病控制的两个关键问题。要有效控制结核病疫情，必须做好结核患者尤其是涂阳肺结核患者的发现和患者的治疗管理工作，即尽可能多地发现结核患者。 从上述数据的统计以及表中的数据结果分析得出：（1）痰涂片是发现和确定传染源的途径，对流行病学调查有重要意义，但其敏感性太低（通常当结核杆菌数量达到5.0×103～1.0×104个/mL以上才能得到阳性结果），而痰结核菌培养是结核病病原学诊断的“金标准”，在结核病细菌学诊断方面具有决定性意义[4]，且痰分支杆菌培养敏感性明显优于涂片法（国内普遍报道结核分支杆菌培养理论上当结核杆菌数量在1.0×101～1.0×102/mL就可以检测出阳性）。在本实验的检测中，将痰液通过消化液消化并结合震荡离心，使得痰标本充分液化而有利于其中的抗酸杆菌沉淀于试管底部，这样不仅提高了标本中结核菌的浓度，也使酸性罗氏培养的阳性率较痰直接涂片高出6倍多，从而有利于结核菌阳性的检出率。（2）根据本次流调结果显示：绵阳市肺结核患病率为20/60萬，比全国第五次流调的显示结果低。 国家重大传染病综合防治示范区项目作为16个重大专项之一，投入3 500余万元，对100万人口进行调查，这也是国家首次将公共卫生纳入国家重大科技项目。2009年绵阳市被确定为国家“十一五”科技攻关重大专项结核、艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治示范区以来，加大了结核病的宣传力度，提高了广大人民群众对结核病防治知识的知晓率，同时严格按照《全国结核病防治工作手册》和《中国结核病防治规划实施工作指南》[5]的要求采取了有效的措施，使本市的患病率低于全国。（3）男性得肺结核病的概率高于女性，其与国内有关文献报道基本一致[6]，这可能与男性的生活方式有关。男性是家庭的主要劳动力，承受的生活压力大并且社会活动范围及接触广，导致了有吸烟、酗酒等不良生活习惯；而吸烟者患肺结核病的概率比不吸烟的人群高出数十倍，从而造成传播的可能性极大。因此男性发病率增高，在今后的工作中，更需将男性列为肺结核病的重点保护人群，做好不良行为的干预与宣传工作，从而降低其发病。
[参考文献]
[1] T Sagwa E，Mantel-Teeuwisse AK，Ruswa N，et al.The burden of adverse events during treatment of drug-resistant tuberculosis in Namibia[J].South Med Rev，2012，5（1）：6-13.
[2] Johnston J，Admon A，Ibrahim A，et al.Long term follow-up of drug resistant and drug susceptible tuberculosis contacts in a Low incidence setting[J].BMC Infect Dis，2012，12（1）：266.
[3] 中国疾病预防控制中心.痰涂片镜检质量保证手册[M].北京：中国协和医科大学出版社，2004：5-18.
[4] 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志，1996，18（3）：127-134.
[5] 卫生部疾病控制司.中国结核病防治规划实施指南[S].2008.
[6] 孙长喜.2004-2010年肺结核流行病学分析[J].职业与健康，2011，27（24）：2899-2830.
（收稿日期：2012-09-12）
[关键词] 肺结核；结核杆菌涂片；结核杆菌培养；阳性率
[中图分类号] R521 [文献标识码] C [文章编号] 2095-0616（2013）01-85-03
结核分支杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB），俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。结核分支杆菌可侵犯全身各器官，引起全身多系统多器官的疾病，但以肺结核最为多见。近年来，结核病死灰复燃，全球结核病疫情呈全球上升趋势，成为全球关注的公共卫生问题和社会问题。据统计，作为单一的传染病，结核病是造成死亡人数最多的传染病，已成为传染病在成年人中的首要死亡原因。全世界有1/3的人口感染或曾经感染过结核，因而结核病仍是全球的一个重要公共卫生问题[1]。中国结核患者数位居全球第二，仅次于印度[2]。2000年我国第四次结核病流行病学抽样调查报告显示，我国现有活动性肺结核患者451万，菌阳肺结核患者196万。而由于診断技术落后，全国约有50%的肺结核排菌患者未被发现，给人群造成巨大威胁。对结核病及时准确的诊断和治疗，是消除传染源、控制结核病流行的重要环节。“国家重大传染病防治综合示范区项目”在全国共建立了五个示范区，四川省绵阳市承担开展“乙肝与结核规模化现场流调及分级协同防治一体化示范研究”国家“十一五”科技重大专项课题。目前结核流调已完成了60万人的健康基线调查，其中发现2 800多名疑似患者。为进一步掌握肺结核患者流行病学特征，以便采取更有效的防治措施，笔者所在医院已对2011年经X胸片复核后提示有结核样病变的368名患者进行了调查，检测结果统计如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
标本采集方式：即时痰、夜间痰和清晨痰；标本采集时间：2011年11月20日～2012年6月20日；标本采集对象：绵阳市健康筛查，经X线胸片复核后提示有结核样病变经复核后仍未排除的疑似肺结核患者。共采集晨痰747份，其中男性有551份，女性有196份，年龄20～88岁，平均（55±35）岁。
1.2 方法
收集有持续2周以上的咳嗽、咳痰、痰中带血或咯血、低烧，胸部X线平片或CT显示肺部有病变的受检人员痰液3份：即时痰、夜间痰和清晨痰。即时痰为受检者在现场留置的痰标本，夜间痰为受检者在送痰前夜在家留置的痰标本，清晨痰为受检者在送痰当日清晨在家留置的痰标本。收到痰标本后，立即进行痰涂片检查和抗酸杆菌培养。痰涂片检查按《中国结核病防治规划——痰涂片镜检标准化操作及质量保证手则》[3]规定程序进行涂片镜检操作。痰培养按《中国结核防治规划——痰培养标准化操作及质量保证手册》规定程序进行操作，采用酸性罗氏培养基进行培养。
1.3 试剂与仪器
抗酸染液与酸性罗氏培养基（珠海贝索生物技术有限公司）、消化液（4%NaoH）、低速离心机（安徽中科佳科学有限公司）、5%CO2培养箱（日本三洋电机株式会）、生物安全柜（安徽航天生物科技有限公司）。
1.4 实验方法
1.4.1 直接痰涂片镜检方法 用竹签的一端挑取痰标本的脓样、干酪样部分约0.05～0.1 mL，置于清洁的载玻片中央处，均匀涂抹成2.5 cm×2.0 cm 的卵圆形痰膜。自然干燥，固定，抗酸染色后镜检。
1.4.2 改良罗氏培养法 首先进行标本处理：选择干酪样、脓性痰液标本，加入2倍量的4%NaOH处理液（黏稠标本适当增加处理液量），充分振荡，3 500 r/min低速离心机离心5 min，倾去上清液，将沉淀物混匀备用。然后接种：取上述沉淀物0.1 mL接种于酸性罗氏培养基斜面，置37℃恒温箱内培养。刚开始时，于第3天和第7天各观察1次，以后每周观察1次，有菌落生长者，经涂片抗酸染色确认后报告阳性，8周后未见菌落生长者为阴性。
1.5 统计学方法
采用SPSS11.0统计学软件分析，组间均数比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同性别阳性率对比
747份痰直接涂片标本中，男性阳性率为0.67%，女性阳性率为0.27%，但两者比较差异无统计学意义（x2=0.02，P>0.05）。见表1。596份酸性罗氏培养基中，男性阳性率为3.85%，女性阳性率为0.34%，差异有统计学意义（x2=4.53，P<0.05），说明男性发病高于女性。见表2。
2.2 两种方法比较结果
596份痰标本用两种方法进行抗酸检测，结果显示痰涂片阳性为4份，涂阳检出率为0.67%，而培养阳性为25份，培养阳性率为4.39%，痰培养阳性率是痰涂片阳性率的6倍多；对其进行配对计数资料的统计分析后，直接痰涂片与改良罗氏培养的检出率比较差异有统计学意义（x2=19.05，P<0.01）。见表3。
3 讨论
近年来，全球结核病疫情呈不断上升趋势，发病率和患者数分别以每年1.1%和2.4%的速度递增。2000年全国结核病流行病学调查结果显示活动性肺结核患者和涂阳肺结核患者的患病率分别是367/10万和122/10万；2011年3月21日全国第五次结核病流行病学调查计划及实施方案报道，2001～2010年，全国共发现和治疗肺结核患者828万例。其中，传染性肺结核患者450万例，传染性肺结核患者治愈率达到90%以上。15岁及以上人群肺结核的患病率由2000年的466/10万降至2010年的459/10万。目前我国有500万活动性肺结核患者，每年有13万患者死于该病，患者发现和治疗成功是结核病控制的两个关键问题。要有效控制结核病疫情，必须做好结核患者尤其是涂阳肺结核患者的发现和患者的治疗管理工作，即尽可能多地发现结核患者。 从上述数据的统计以及表中的数据结果分析得出：（1）痰涂片是发现和确定传染源的途径，对流行病学调查有重要意义，但其敏感性太低（通常当结核杆菌数量达到5.0×103～1.0×104个/mL以上才能得到阳性结果），而痰结核菌培养是结核病病原学诊断的“金标准”，在结核病细菌学诊断方面具有决定性意义[4]，且痰分支杆菌培养敏感性明显优于涂片法（国内普遍报道结核分支杆菌培养理论上当结核杆菌数量在1.0×101～1.0×102/mL就可以检测出阳性）。在本实验的检测中，将痰液通过消化液消化并结合震荡离心，使得痰标本充分液化而有利于其中的抗酸杆菌沉淀于试管底部，这样不仅提高了标本中结核菌的浓度，也使酸性罗氏培养的阳性率较痰直接涂片高出6倍多，从而有利于结核菌阳性的检出率。（2）根据本次流调结果显示：绵阳市肺结核患病率为20/60萬，比全国第五次流调的显示结果低。 国家重大传染病综合防治示范区项目作为16个重大专项之一，投入3 500余万元，对100万人口进行调查，这也是国家首次将公共卫生纳入国家重大科技项目。2009年绵阳市被确定为国家“十一五”科技攻关重大专项结核、艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治示范区以来，加大了结核病的宣传力度，提高了广大人民群众对结核病防治知识的知晓率，同时严格按照《全国结核病防治工作手册》和《中国结核病防治规划实施工作指南》[5]的要求采取了有效的措施，使本市的患病率低于全国。（3）男性得肺结核病的概率高于女性，其与国内有关文献报道基本一致[6]，这可能与男性的生活方式有关。男性是家庭的主要劳动力，承受的生活压力大并且社会活动范围及接触广，导致了有吸烟、酗酒等不良生活习惯；而吸烟者患肺结核病的概率比不吸烟的人群高出数十倍，从而造成传播的可能性极大。因此男性发病率增高，在今后的工作中，更需将男性列为肺结核病的重点保护人群，做好不良行为的干预与宣传工作，从而降低其发病。
[参考文献]
[1] T Sagwa E，Mantel-Teeuwisse AK，Ruswa N，et al.The burden of adverse events during treatment of drug-resistant tuberculosis in Namibia[J].South Med Rev，2012，5（1）：6-13.
[2] Johnston J，Admon A，Ibrahim A，et al.Long term follow-up of drug resistant and drug susceptible tuberculosis contacts in a Low incidence setting[J].BMC Infect Dis，2012，12（1）：266.
[3] 中国疾病预防控制中心.痰涂片镜检质量保证手册[M].北京：中国协和医科大学出版社，2004：5-18.
[4] 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志，1996，18（3）：127-134.
[5] 卫生部疾病控制司.中国结核病防治规划实施指南[S].2008.
[6] 孙长喜.2004-2010年肺结核流行病学分析[J].职业与健康，2011，27（24）：2899-2830.
（收稿日期：2012-09-12）