肿瘤抑素相关肽T42肽的构建、纯化及其抗肝癌细胞活性

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhoushuoqd
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目的 采用基因工程技术成功构建出肿瘤抑素相关肽T42肽,然后用基因工程重组菌pgex-4t-t使其高效表达,并提取纯化T42肽,观察其抗肝癌细胞活性.方法 用人工合成T42基因,将其链接到pgex-4t-1表达载体中,构建表达载体pgex-4t-t42,将该质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中培养,采用几丁质柱亲和层析纯化T42肽.在体外对肝癌细胞进行噻唑蓝(MTT)实验,实验分4组:T42肽组、磷酸盐缓冲液(PBS)阴性对照组、氟尿嘧啶阳性对照组和空白对照组.T42肽组与氟尿嘧啶组分别加入不同浓度的肿瘤抑素T42肽和氟尿嘧啶,浓度梯度为10、20、30、40、50 mmol/L,PBS组加入等体积的PBS,比较不同浓度T42肽作用下细胞存活率的变化,观察T42肽对人肝癌HepG2细胞、LO2细胞活性的影响.结果 成功提取纯度在90%以上的T42肽,其相对分子质量与理论值基本一致.MTT实验结果显示:PBS对照组细胞的存活率为(96.86±1.12)%,T42肽组及氟尿嘧啶组的细胞存活率明显高于与PBS组,差异均有统计学意义(P<0.01),而T42肽组与氟尿嘧啶组间的差异无统计学意义(P>0.05).随着T42肽药物浓度的升高HepG2细胞的存活率逐渐下降.吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色结果显示,浓度为30 mmol/L的T42肽作用48 h后,HepG2细胞出现核皱缩、胞膜受损等细胞凋亡的特征性变化.结论 T42肽可明显抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖,并促进其凋亡,显示出较强的抗肿瘤细胞活性。

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