论文部分内容阅读
摘要：用高脂饲料喂饲大鼠6周，复制成高脂血症模型，而后进行4周高、低两种剂量的绞股蓝和阳性对照药血脂康进行实验性治疗。给药4周后处死动物，比较血清总胆固醇及甘油三酯含量、血清高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，同时测定血浆总脂解酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶活性。结果发现，高、低剂量绞股蓝和血脂康均能使血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量降低，同时能提高血浆总脂解酶和脂蛋白脂酶活性，高剂量绞股蓝还能显著提高肝脂酶活性。结果提示，绞股蓝具有明显的降低肝脏和血清脂质的作用，可能与提高血浆脂蛋白代谢相关酶的活性有关。
关键词：高脂血症；脂蛋白；总脂解酶；脂蛋白脂酶；肝脂酶
中图分类号：G804．32 文献标识码：A 文章编号：1007—3612(2007)02—0206—03
研究表明，血脂代谢紊乱(胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白升高，高密度脂蛋白降低)与动脉粥样硬化密切相关，防治血脂代谢紊乱可有效减少心脑血管病的发病率。现代久坐不动的生活方式和日渐改善的生活条件导致机体脂代谢紊乱已成为心脑血管病的主要危险因素，有效的改善机体脂代谢成为预防心脑血管病的重要手段。绞股蓝(Gynostermmapenta—phyllum GP)是葫芦科绞股蓝属植物，其根或茎全草入药，大量l临床资料证实其调脂功效)。近20年来，日本和我国不少学者对GP进行了大量研究，发现其主要药效成份为绞股蓝总皂甙(GPs)。本实验试图使用GPs对实验性高脂血症大鼠的脂代谢进行干预，并观察其改善机体脂代谢的机理。
1 研究对象与方法
1．1研究对象雄性Wistar大鼠75只，9周龄，体重250±10g，为Ⅱ级实验动物，购于中南大学医学部实验动物学部。室温20～24℃，自然光照，自由饮食、饮水，每笼5只饲养1周后用于实验。
1．2动物模型的建立与分组实验大鼠随机分为五组，A组(正常对照组)，B组(高脂模型组)，C组(GPs低剂量组)，D组(GPs高剂量组)，E组(血脂康组)各15只。模型组和给药组给高脂饲料(猪油8％，胆固醇2％，加90％普通饲料混匀)喂养42 d(6周)，造成高脂血症。正常对照组大鼠，普通饲料正常饮食。
给药方式绞股蓝总皂甙购自宁波中药制药厂，灌胃，结合目前在人体的实验剂量和有关剂量换算方法，绞股蓝总皂甙给药高剂量组200 mg，kg，d，低剂量组50 mg/kg／d(绞股蓝总皂甙低剂量约为人体正常剂量的2倍，高剂量为人体正常剂量的8倍)，血脂康组给血脂康200 mg/kg/d，对照组使用生理盐水，每周7d，连续灌胃4周。给药期间，模型组和各给药组保持高脂饮食。
1．3测试方法在6周的动物造模前、后，分别对大鼠进行眼眶取血，测定TC，TG，HDL—c(high density lipoprotein cholesterol，HDL—c)，用于模型检测。给药四周后处死动物，处死前3 d晚上9时撤去饲料，处死前2d上午眼眶取血，血清用于测定TC、TG、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL—c)。恢复喂食并于当日晚上9时再次撤去饲料，第3 d上午尾静脉注射肝素(312．5 u／kg)。15 min后摘除眼球取肝素化血浆，测定肝素化血浆总脂解酶(postheparin total activity，PHTA)、脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase，LPL)和肝脂酶(hepatic lipase，HL)活性。
血清TC、TG、HDL—c及LDL—c，采用酶联试剂盒测定，试剂盒均购自北京中生生物工程高技术公司。
PHTA、肝脂酶和LPL活性测定是以脂肪乳剂为底物，在37℃，pH 8．3条件下与一定量的血浆保温30 min，血浆中的LPL及肝脂酶可将底物中的TG水解为甘油和游离脂肪酸(freefatty acid，FFA)，用铜试剂法测定生成的FFA含量，即可分别计算出PHTA、LPL和HL活性。
2 结 果
2．1 动物模型检验 普食1周后(即造型前)分别测得60只大鼠TC、TG、HDL—c均位于正常水平，但高脂喂养6周后(造型后)再测TC、TG均较造型前显著升高(P<0．01)，而HDLC则显著下降(P<0．010)(表1)。说明大鼠出现了高脂血症，动物模型是成功的。
2．2对血浆胆固醇和甘油三酯的影响与正常对照组对比，高脂模型组的TC和TG都有较大的升高。低剂量绞股蓝总皂甙、高剂量绞股蓝总皂甙和血脂康与模型组相比都能显著降低血浆胆固醇含量，其中高剂量组和血脂康组效果更好。同时各给药组的甘油三脂含量也有下降，以高剂量绞股蓝组效果最好，说明绞股蓝总皂甙与血脂康有同样的降低血浆胆固醇和甘油三酯的作用(表2)。
2．3对血浆LDL—c、HDL—c的影响 与正常对照组对比，高脂模型组HDL—c显著降低，而LDL—c显著升高。实验结果显示，低剂量绞股蓝总皂甙、高剂量绞股蓝总皂甙和血脂康与模型组相比都能显著降低血清低密度脂蛋白含量，其中高剂量绞股蓝组效果更好。同时各给药组与模型组相比血清高密度脂蛋白含量显著上升，以高剂量绞股蓝组效果最好，这说明绞股蓝总皂甙与降脂康有同样的降低LDL—c及提高HDL—C的作用，可以改善血脂成分(表3)。
2．4对血浆总脂解酶(PHTA)、脂蛋白脂酶(IAOL)、肝脂酶(HL)活性的影响 与正常对照组对比，高脂模型组PHTA、HL、LPL活性均显著降低，低、高剂量绞股蓝能提高PHTA和LPL活性，高剂量姜黄素能显著提高肝脂酶活性，血脂康对脂代谢相关酶类活性的影响主要体现在提高脂蛋白脂酶活性(表4)。
3讨 论
研究表明，血脂异常，尤其低密度脂蛋白胆固醇水平升高与动脉样硬化发生密切相关。随着生活水平的改善，我国人群血脂水平不断升高，冠心病发病率增加，并向年轻化发展。血脂异常的防治已成为冠心病一级和二级预防的主要手段。近年来，中药对脂代谢紊乱的调剂受到大家的重视，已有多方面的研究。
血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯_和胆固醇)和类脂(磷脂糖脂、固醇类固醇)的总称，与临床密切相关的血脂主要是甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)，其他还有磷脂和游离脂肪酸等。循环血液中的脂类必须与特殊的蛋白质即载脂蛋白结合形成脂蛋白后才能被运输至组织进行代谢。
应用超速离心方法，可将血浆脂蛋白分为：乳糜微粒(cM)、中间密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL—c)和高密度脂蛋白(HDL—C)。LDL—c是胆固醇的主要载体，经LDL受体介导摄取而被外周组织利用，与冠心病直接相关。HDL—c促进胆固醇从外周组织移去，转运胆固醇至肝脏或其他组织再分布，HDL—c与冠心病负相关。
药理研究表明：绞股蓝总苷亦可降低过氧化脂质及降低血清TG、TC、LDL—c，升高HDL—c，从而促进和提高脂质代谢水平，改善和调节脂质代谢紊乱。张炜平等研究表明：绞股蓝总苷在预防实验和治疗实验中均可降低高血脂大鼠血清中TC、TG和LDL—c含量，升高HDL—C／LDL—c比值。本研究结果亦显示：绞股蓝总皂甙能改善血脂代谢水平，降低血液中TC、TG、LDL—C，升高HDL—c，从而减少动脉粥样硬化、冠心病发病的危险因素。
LPL和肝脂酶是血液循环中与内源性TG代谢有关的两种关键酶。LPL存在于肝外组织毛细血管内皮细胞表面。它主要催化血浆中乳糜微粒(chylomicrons，CM)和VLDL中TG的水解，在CM及VLDL的降解中发挥重要作用，而肝脂酶则仅存在于肝内皮细胞表面，它主要在中间密度脂蛋白和HDL代谢中起重要作用。LPL和肝脂酶活性受多种因素影响，它们的缺陷或活性降低可导致CM及VLDL降解障碍，引起高TG血症。
本实验证明，高脂模型组PHTA、LPL、肝脂酶活性明显降低，可能是高脂膳食抑制肝脏和其它组织合成脂酶，绞股蓝总皂甙能使PHTA、LPL和肝脂酶活性增高，通过增加上述酶的活性，从而加快富含TG脂蛋白的代谢，使血清和肝脏TC含量显著降低。血脂康也能使LPL活性增高，有利于去除血液循环中富含TG的脂蛋白，从而降低TG含量。
注：“本文中所涉及的注解、图表、公式等请以ＰＤＦ格式阅读原文。”
关键词：高脂血症；脂蛋白；总脂解酶；脂蛋白脂酶；肝脂酶
中图分类号：G804．32 文献标识码：A 文章编号：1007—3612(2007)02—0206—03
研究表明，血脂代谢紊乱(胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白升高，高密度脂蛋白降低)与动脉粥样硬化密切相关，防治血脂代谢紊乱可有效减少心脑血管病的发病率。现代久坐不动的生活方式和日渐改善的生活条件导致机体脂代谢紊乱已成为心脑血管病的主要危险因素，有效的改善机体脂代谢成为预防心脑血管病的重要手段。绞股蓝(Gynostermmapenta—phyllum GP)是葫芦科绞股蓝属植物，其根或茎全草入药，大量l临床资料证实其调脂功效)。近20年来，日本和我国不少学者对GP进行了大量研究，发现其主要药效成份为绞股蓝总皂甙(GPs)。本实验试图使用GPs对实验性高脂血症大鼠的脂代谢进行干预，并观察其改善机体脂代谢的机理。
1 研究对象与方法
1．1研究对象雄性Wistar大鼠75只，9周龄，体重250±10g，为Ⅱ级实验动物，购于中南大学医学部实验动物学部。室温20～24℃，自然光照，自由饮食、饮水，每笼5只饲养1周后用于实验。
1．2动物模型的建立与分组实验大鼠随机分为五组，A组(正常对照组)，B组(高脂模型组)，C组(GPs低剂量组)，D组(GPs高剂量组)，E组(血脂康组)各15只。模型组和给药组给高脂饲料(猪油8％，胆固醇2％，加90％普通饲料混匀)喂养42 d(6周)，造成高脂血症。正常对照组大鼠，普通饲料正常饮食。
给药方式绞股蓝总皂甙购自宁波中药制药厂，灌胃，结合目前在人体的实验剂量和有关剂量换算方法，绞股蓝总皂甙给药高剂量组200 mg，kg，d，低剂量组50 mg/kg／d(绞股蓝总皂甙低剂量约为人体正常剂量的2倍，高剂量为人体正常剂量的8倍)，血脂康组给血脂康200 mg/kg/d，对照组使用生理盐水，每周7d，连续灌胃4周。给药期间，模型组和各给药组保持高脂饮食。
1．3测试方法在6周的动物造模前、后，分别对大鼠进行眼眶取血，测定TC，TG，HDL—c(high density lipoprotein cholesterol，HDL—c)，用于模型检测。给药四周后处死动物，处死前3 d晚上9时撤去饲料，处死前2d上午眼眶取血，血清用于测定TC、TG、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL—c)。恢复喂食并于当日晚上9时再次撤去饲料，第3 d上午尾静脉注射肝素(312．5 u／kg)。15 min后摘除眼球取肝素化血浆，测定肝素化血浆总脂解酶(postheparin total activity，PHTA)、脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase，LPL)和肝脂酶(hepatic lipase，HL)活性。
血清TC、TG、HDL—c及LDL—c，采用酶联试剂盒测定，试剂盒均购自北京中生生物工程高技术公司。
PHTA、肝脂酶和LPL活性测定是以脂肪乳剂为底物，在37℃，pH 8．3条件下与一定量的血浆保温30 min，血浆中的LPL及肝脂酶可将底物中的TG水解为甘油和游离脂肪酸(freefatty acid，FFA)，用铜试剂法测定生成的FFA含量，即可分别计算出PHTA、LPL和HL活性。
2 结 果
2．1 动物模型检验 普食1周后(即造型前)分别测得60只大鼠TC、TG、HDL—c均位于正常水平，但高脂喂养6周后(造型后)再测TC、TG均较造型前显著升高(P<0．01)，而HDLC则显著下降(P<0．010)(表1)。说明大鼠出现了高脂血症，动物模型是成功的。
2．2对血浆胆固醇和甘油三酯的影响与正常对照组对比，高脂模型组的TC和TG都有较大的升高。低剂量绞股蓝总皂甙、高剂量绞股蓝总皂甙和血脂康与模型组相比都能显著降低血浆胆固醇含量，其中高剂量组和血脂康组效果更好。同时各给药组的甘油三脂含量也有下降，以高剂量绞股蓝组效果最好，说明绞股蓝总皂甙与血脂康有同样的降低血浆胆固醇和甘油三酯的作用(表2)。
2．3对血浆LDL—c、HDL—c的影响 与正常对照组对比，高脂模型组HDL—c显著降低，而LDL—c显著升高。实验结果显示，低剂量绞股蓝总皂甙、高剂量绞股蓝总皂甙和血脂康与模型组相比都能显著降低血清低密度脂蛋白含量，其中高剂量绞股蓝组效果更好。同时各给药组与模型组相比血清高密度脂蛋白含量显著上升，以高剂量绞股蓝组效果最好，这说明绞股蓝总皂甙与降脂康有同样的降低LDL—c及提高HDL—C的作用，可以改善血脂成分(表3)。
2．4对血浆总脂解酶(PHTA)、脂蛋白脂酶(IAOL)、肝脂酶(HL)活性的影响 与正常对照组对比，高脂模型组PHTA、HL、LPL活性均显著降低，低、高剂量绞股蓝能提高PHTA和LPL活性，高剂量姜黄素能显著提高肝脂酶活性，血脂康对脂代谢相关酶类活性的影响主要体现在提高脂蛋白脂酶活性(表4)。
3讨 论
研究表明，血脂异常，尤其低密度脂蛋白胆固醇水平升高与动脉样硬化发生密切相关。随着生活水平的改善，我国人群血脂水平不断升高，冠心病发病率增加，并向年轻化发展。血脂异常的防治已成为冠心病一级和二级预防的主要手段。近年来，中药对脂代谢紊乱的调剂受到大家的重视，已有多方面的研究。
血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯_和胆固醇)和类脂(磷脂糖脂、固醇类固醇)的总称，与临床密切相关的血脂主要是甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)，其他还有磷脂和游离脂肪酸等。循环血液中的脂类必须与特殊的蛋白质即载脂蛋白结合形成脂蛋白后才能被运输至组织进行代谢。
应用超速离心方法，可将血浆脂蛋白分为：乳糜微粒(cM)、中间密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL—c)和高密度脂蛋白(HDL—C)。LDL—c是胆固醇的主要载体，经LDL受体介导摄取而被外周组织利用，与冠心病直接相关。HDL—c促进胆固醇从外周组织移去，转运胆固醇至肝脏或其他组织再分布，HDL—c与冠心病负相关。
药理研究表明：绞股蓝总苷亦可降低过氧化脂质及降低血清TG、TC、LDL—c，升高HDL—c，从而促进和提高脂质代谢水平，改善和调节脂质代谢紊乱。张炜平等研究表明：绞股蓝总苷在预防实验和治疗实验中均可降低高血脂大鼠血清中TC、TG和LDL—c含量，升高HDL—C／LDL—c比值。本研究结果亦显示：绞股蓝总皂甙能改善血脂代谢水平，降低血液中TC、TG、LDL—C，升高HDL—c，从而减少动脉粥样硬化、冠心病发病的危险因素。
LPL和肝脂酶是血液循环中与内源性TG代谢有关的两种关键酶。LPL存在于肝外组织毛细血管内皮细胞表面。它主要催化血浆中乳糜微粒(chylomicrons，CM)和VLDL中TG的水解，在CM及VLDL的降解中发挥重要作用，而肝脂酶则仅存在于肝内皮细胞表面，它主要在中间密度脂蛋白和HDL代谢中起重要作用。LPL和肝脂酶活性受多种因素影响，它们的缺陷或活性降低可导致CM及VLDL降解障碍，引起高TG血症。
本实验证明，高脂模型组PHTA、LPL、肝脂酶活性明显降低，可能是高脂膳食抑制肝脏和其它组织合成脂酶，绞股蓝总皂甙能使PHTA、LPL和肝脂酶活性增高，通过增加上述酶的活性，从而加快富含TG脂蛋白的代谢，使血清和肝脏TC含量显著降低。血脂康也能使LPL活性增高，有利于去除血液循环中富含TG的脂蛋白，从而降低TG含量。
注：“本文中所涉及的注解、图表、公式等请以ＰＤＦ格式阅读原文。”