【摘 要】
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目的探索一项简便、经济的提取人甲状腺促甲状腺激素(thyroitropin,TSH)受体-Gs蛋白-腺苷酸环化酶信息传递系统及检测TSH受体敏感性的方法.方法用高速离心法,从低温保存的人
【机 构】
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上海铁道大学附属甘泉医院内分泌科,上海,200065;上海医科大学中山医院内分泌科,上海,200032
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目的探索一项简便、经济的提取人甲状腺促甲状腺激素(thyroitropin,TSH)受体-Gs蛋白-腺苷酸环化酶信息传递系统及检测TSH受体敏感性的方法.方法用高速离心法,从低温保存的人甲状腺组织提取细胞膜蛋白TSH受体及与之偶联的Gs蛋白-腺苷酸环化酶,以腺苷酸环化酶的活性反映TSH受体与配基TSH结合的敏感性.结果提取膜蛋白量(30～180 μg)与cAMP生成量之间呈显著的线性相关(r=0.987,P＜0.005);膜蛋白量相同时(50 μg),配基人TSH(hTSH)浓度(0～2 500 μ IU/ml)与cAMP生成量之间呈极显著的线性相关(r=0.954,P＜0.001);Gs蛋白兴奋剂GTPγS浓度(0～1.0 mmol/L)与cAMP生成量之间亦呈极显著性相关(r=0.986,P＜0.001).结论该方法制备到完整的TSH受体-Gs蛋白-腺苷酸环化酶信号传递系统,腺苷酸环化酶活性能较好反映TSH受体对配基hTSH刺激的敏感性.此方法简便经济,可用于甲状腺TSH受体-Gs蛋白-腺苷酸环化酶信号传递系统的实验室研究.
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