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摘 要：林可霉素一般系抑菌剂，但在高浓度下，对高度敏感细菌也具有杀菌作用。发酵效价测定：卡赛帕克C18MGⅡ液相色谱柱（4.6×250mm 5？m），0.02 mol/L磷酸氢二铵-乙腈（75∶25，V/V），检测波长为214nm，流速为1.0ml/min，柱温为25℃。本实验通过不同碳源、十二烷基硫酸钠使用量等以发酵效价为指标对林可霉素发酵工艺进行研究。
关键词：林可霉素；工艺；研究
林可霉素，中文别名洁霉素、林肯霉素等，一般系抑菌剂，但在高浓度下，对高度敏感细菌也具有杀菌作用。林可霉素用于敏感葡萄球菌属、链球菌属、肺炎链球菌及厌氧菌所致的呼吸道感染、皮肤软组织感染、女性生殖道感染等。本实验通过不同碳源、十二烷基硫酸钠使用量等以发酵效价为指标对林可霉素发酵工艺进行研究。
1 材料和方法
1.1 菌种
林可霉素。
1.2 材料与试剂
淀粉（西安智诚生物科技有限公司）、葡萄糖（西安晋湘药用辅料有限公司）、黄豆饼粉（西安智诚生物科技有限公司）、玉米浆（西安智诚生物科技有限公司）、硫酸二氢钾（合肥博美生物科技有限责任公司）、硫酸铵（合肥博美生物科技有限责任公司）、硝酸铵（合肥博美生物科技有限责任公司）、碳酸钙（合肥博美生物科技有限责任公司）、氯化钠（合肥博美生物科技有限责任公司）、硝酸钠（合肥博美生物科技有限责任公司）。甲醇（东营市鑫旺化工有限责任公司）、磷酸氢二铵（东营市鑫旺化工有限责任公司）、乙腈（东营市鑫旺化工有限责任公司）、乙醇（南通润丰石油化工有限公司）。
1.3 仪器
KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅-DU-30（杭州汇尔仪器设备有限公司）；PHS-25C 台式酸度计（常州金坛精达仪器制造有限公司）双光束紫外可见分光光度计-UV1900（杭州汇尔仪器设备有限公司）；KYX-800YS 色谱配套超声波清洗机（沈阳科晶自动化设备有限公司）；实验室培养箱（北京博劢行仪器有限公司）；恒温振荡器摇床（常州万科仪器科技有限公司）；恒温恒湿试验箱（东莞市正台测试仪器有限公司）；DW-9型自动培养基分装器（杭州大微生物技术有限公司）；Plus-E3超纯水机实验室级超纯水机（南京易普易达科技发展有限公司）；；LAB-UPH-10T高端型实验室超纯水机（台上式）（四川兰博环保设备有限公司）；分析天平（常州市幸运电子设备有限公司）；PC-220色谱柱恒温箱（天津艾维欧科技发展有限公司）；卡赛帕克C18MGⅡ液相色谱柱（4.6×250mm 5？滋m）。
1.4培养基及培养条件
1.4.1 种子培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（1.9：2.5：2.5：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085），湿热灭菌二十分钟。
1.4.2 种子罐培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（1.9：2.5：2.4：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085）。
1.4.3 发酵培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（3.9：2.7：3.8：0.6：0.05：0.2：0.15：0.7：0.6：0.5），湿热灭菌二十分钟。
1.4.4 发酵罐培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（3.9：2.7：3.8：0.6：0.03：0.2：0.15：0.8：0.6：0.5）。
1.5 分析方法
pH测定：酸度计测定。
发酵效价测定：高效液色谱法，卡赛帕克C18MGⅡ液相色谱柱（4.6×250mm 5？滋m），0.02 mol/L磷酸氢二铵-乙腈（75∶25，V/V），检测波长为214nm，流速为1.0ml/min，柱温为25℃。
2 结果与讨论
2.1 不同碳源对生物合成的影响
本实验分别采用果糖、麦芽糖、葡萄糖、糊精、蔗糖、淀粉、乳糖、甘露醇等作为唯一碳源进行试验。结果表明使用葡萄糖和淀粉时效价较高。
2.2 十二烷基硫酸钠使用量对生物合成的影响
本实验分别采用不同含量的十二烷基硫酸钠进行试验，研究其对生物合成的影响。十二烷基硫酸钠使用量配比为0.1%时，三次实验的产量分别为2420μg/mL、2450μg/mL、2460μg/mL，平均为22443μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.15%时，三次实验的产量分别为2420μg/mL、2390μg/mL、2490μg/mL，平均为2433μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.2%时，三次实验的产量分别为2400μg/mL、2410μg/mL、2440μg/mL，平均为2417μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.25%时，三次实验的产量分别为2500μg/mL、2510μg/mL、2530μg/mL，平均为2513μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.3%时，三次实验的产量分别为2460μg/mL、2450μg/mL、2400μg/mL，平均为2437μg/mL。试验结果表明蛋白胨含量为0.25%产量最高。
2.3 不同搅拌桨对生物合成的影响
本实验分别采用六箭叶搅拌桨和六平叶搅拌桨进行试验。结果表明使用六平叶搅拌桨时效价较高。
参考文献
[1]高效液相色谱法测定饲料添加剂中盐酸林可霉素的含量[J].程建国，宋艳红，王仲琴，徐景，赵晶晶.饲料工业. 2011（19）.
[2]RP-HPLC测定复方麻黄碱滴鼻液中盐酸麻黄碱、盐酸林可霉素和地塞米松磷酸钠含量的方法学研究[J].韩加怡，李会林.中国现代应用药学.2008（02）.
[3]HPLC测定复方盐酸去氧肾上腺素喷鼻液中盐酸去氧肾上腺素、地塞米松磷酸钠和盐酸林可霉素的含量[J].黄滔敏，段更利，王东蕾，赖永华，陈念祖，闫晶超，顾纪锋.复旦学报（医学版）.2010（05）.
[4]Development and Validation of Electromigration Technique for the Determination of Lincomycin and Clindamycin Residues in Poultry Tissues[J] . Piotr Kowalski，Lucyna Konieczna，Ilona Ol？dzka，Alina Plenis，Tomasz B？czek. Food Analytical Methods . 2014 （2）.
[5]林可霉素-大觀霉素复方混悬注射液中有效成分含量的HPLC法测定[J].王忠，王立琦，刘小琴，范惠敏，黄显会，曾振灵.动物医学进展.2011（09）.
[6]HPLC法测定复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素和利巴韦林[J].李维超，佟若菲，张囡，陈贵起.现代药物与临床.2015（01）
关键词：林可霉素；工艺；研究
林可霉素，中文别名洁霉素、林肯霉素等，一般系抑菌剂，但在高浓度下，对高度敏感细菌也具有杀菌作用。林可霉素用于敏感葡萄球菌属、链球菌属、肺炎链球菌及厌氧菌所致的呼吸道感染、皮肤软组织感染、女性生殖道感染等。本实验通过不同碳源、十二烷基硫酸钠使用量等以发酵效价为指标对林可霉素发酵工艺进行研究。
1 材料和方法
1.1 菌种
林可霉素。
1.2 材料与试剂
淀粉（西安智诚生物科技有限公司）、葡萄糖（西安晋湘药用辅料有限公司）、黄豆饼粉（西安智诚生物科技有限公司）、玉米浆（西安智诚生物科技有限公司）、硫酸二氢钾（合肥博美生物科技有限责任公司）、硫酸铵（合肥博美生物科技有限责任公司）、硝酸铵（合肥博美生物科技有限责任公司）、碳酸钙（合肥博美生物科技有限责任公司）、氯化钠（合肥博美生物科技有限责任公司）、硝酸钠（合肥博美生物科技有限责任公司）。甲醇（东营市鑫旺化工有限责任公司）、磷酸氢二铵（东营市鑫旺化工有限责任公司）、乙腈（东营市鑫旺化工有限责任公司）、乙醇（南通润丰石油化工有限公司）。
1.3 仪器
KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅-DU-30（杭州汇尔仪器设备有限公司）；PHS-25C 台式酸度计（常州金坛精达仪器制造有限公司）双光束紫外可见分光光度计-UV1900（杭州汇尔仪器设备有限公司）；KYX-800YS 色谱配套超声波清洗机（沈阳科晶自动化设备有限公司）；实验室培养箱（北京博劢行仪器有限公司）；恒温振荡器摇床（常州万科仪器科技有限公司）；恒温恒湿试验箱（东莞市正台测试仪器有限公司）；DW-9型自动培养基分装器（杭州大微生物技术有限公司）；Plus-E3超纯水机实验室级超纯水机（南京易普易达科技发展有限公司）；；LAB-UPH-10T高端型实验室超纯水机（台上式）（四川兰博环保设备有限公司）；分析天平（常州市幸运电子设备有限公司）；PC-220色谱柱恒温箱（天津艾维欧科技发展有限公司）；卡赛帕克C18MGⅡ液相色谱柱（4.6×250mm 5？滋m）。
1.4培养基及培养条件
1.4.1 种子培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（1.9：2.5：2.5：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085），湿热灭菌二十分钟。
1.4.2 种子罐培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（1.9：2.5：2.4：2.6：0.005：0.2：0.15：0.7：0.06：0.085）。
1.4.3 发酵培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（3.9：2.7：3.8：0.6：0.05：0.2：0.15：0.7：0.6：0.5），湿热灭菌二十分钟。
1.4.4 发酵罐培养基：淀粉：葡萄糖：黄豆饼粉：玉米浆：硫酸二氢钾：硫酸铵：硝酸铵：碳酸钙：氯化钠：硝酸钠（3.9：2.7：3.8：0.6：0.03：0.2：0.15：0.8：0.6：0.5）。
1.5 分析方法
pH测定：酸度计测定。
发酵效价测定：高效液色谱法，卡赛帕克C18MGⅡ液相色谱柱（4.6×250mm 5？滋m），0.02 mol/L磷酸氢二铵-乙腈（75∶25，V/V），检测波长为214nm，流速为1.0ml/min，柱温为25℃。
2 结果与讨论
2.1 不同碳源对生物合成的影响
本实验分别采用果糖、麦芽糖、葡萄糖、糊精、蔗糖、淀粉、乳糖、甘露醇等作为唯一碳源进行试验。结果表明使用葡萄糖和淀粉时效价较高。
2.2 十二烷基硫酸钠使用量对生物合成的影响
本实验分别采用不同含量的十二烷基硫酸钠进行试验，研究其对生物合成的影响。十二烷基硫酸钠使用量配比为0.1%时，三次实验的产量分别为2420μg/mL、2450μg/mL、2460μg/mL，平均为22443μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.15%时，三次实验的产量分别为2420μg/mL、2390μg/mL、2490μg/mL，平均为2433μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.2%时，三次实验的产量分别为2400μg/mL、2410μg/mL、2440μg/mL，平均为2417μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.25%时，三次实验的产量分别为2500μg/mL、2510μg/mL、2530μg/mL，平均为2513μg/mL。十二烷基硫酸钠配比为0.3%时，三次实验的产量分别为2460μg/mL、2450μg/mL、2400μg/mL，平均为2437μg/mL。试验结果表明蛋白胨含量为0.25%产量最高。
2.3 不同搅拌桨对生物合成的影响
本实验分别采用六箭叶搅拌桨和六平叶搅拌桨进行试验。结果表明使用六平叶搅拌桨时效价较高。
参考文献
[1]高效液相色谱法测定饲料添加剂中盐酸林可霉素的含量[J].程建国，宋艳红，王仲琴，徐景，赵晶晶.饲料工业. 2011（19）.
[2]RP-HPLC测定复方麻黄碱滴鼻液中盐酸麻黄碱、盐酸林可霉素和地塞米松磷酸钠含量的方法学研究[J].韩加怡，李会林.中国现代应用药学.2008（02）.
[3]HPLC测定复方盐酸去氧肾上腺素喷鼻液中盐酸去氧肾上腺素、地塞米松磷酸钠和盐酸林可霉素的含量[J].黄滔敏，段更利，王东蕾，赖永华，陈念祖，闫晶超，顾纪锋.复旦学报（医学版）.2010（05）.
[4]Development and Validation of Electromigration Technique for the Determination of Lincomycin and Clindamycin Residues in Poultry Tissues[J] . Piotr Kowalski，Lucyna Konieczna，Ilona Ol？dzka，Alina Plenis，Tomasz B？czek. Food Analytical Methods . 2014 （2）.
[5]林可霉素-大觀霉素复方混悬注射液中有效成分含量的HPLC法测定[J].王忠，王立琦，刘小琴，范惠敏，黄显会，曾振灵.动物医学进展.2011（09）.
[6]HPLC法测定复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素和利巴韦林[J].李维超，佟若菲，张囡，陈贵起.现代药物与临床.2015（01）