【摘 要】
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本研究旨在针对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)建立两种快速、敏感、特异的荧光定量PCR诊断方法并对其临床实用性进行比较.试验根据呼肠孤病毒S1基因序列设计合成1对特异性引物和1条MGB探针,分别建立TaqMan和SYBR GreenI两种荧光定量PCR检测方法,并对两种方法的特异性、灵敏性、重复性进行比较.结果 显示,两种检测方法标准曲线的相关系数均为0.999,对鸭细小病毒(DPV)、A型鸭甲肝病毒(DHV-1)、C型鸭甲肝病毒(DHV-3)、鸭传染性支气管炎(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鹅星状病
【机 构】
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西南大学动物医学免疫研究中心,重庆402460;上海海关,上海200135;贵州省动物疫病预防控制中心,贵州贵阳550008;重庆三捷众新生物工程有限公司,重庆402460
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本研究旨在针对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)建立两种快速、敏感、特异的荧光定量PCR诊断方法并对其临床实用性进行比较.试验根据呼肠孤病毒S1基因序列设计合成1对特异性引物和1条MGB探针,分别建立TaqMan和SYBR GreenI两种荧光定量PCR检测方法,并对两种方法的特异性、灵敏性、重复性进行比较.结果 显示,两种检测方法标准曲线的相关系数均为0.999,对鸭细小病毒(DPV)、A型鸭甲肝病毒(DHV-1)、C型鸭甲肝病毒(DHV-3)、鸭传染性支气管炎(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鹅星状病毒(JSHV)的检测结果均为阴性,特异性良好.SYBR GreenI法的最低检测限度为100拷贝/μL,TaqMan法的最低检测限度为101拷贝/μL,前者的灵敏度比后者高10倍.SYBR GreenI法和TaqMan法重复性试验的组内和组问变异系数均分别小于2.1％和1.8％.利用这两种方法对临床30份疑似病料进行检测,其中TaqMan法检出29份,SYBR Green I法检出30份,符合率为97％.综上,两种荧光定量方法均可用于临床NDRV的检测,尤以SYBR Green I法灵敏度更高.
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