实时荧光定量PCR检测工程酵母制备重组单克隆抗体原液中的宿主DNA残余

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目的:建立实时荧光定量PCR法检测基于新型工程化酵母制备的重组单克隆抗体原液中残留DNA的含量,完善临床前质量控制研究资料。方法:以毕赤酵母工程菌的基因组DNA作为标准品,选择在毕赤酵母中基因拷贝数高的5S rRNA基因作为检测基因,合成特异性引物;通过优化反应体系、加样回收方法,建立实时荧光定量PCR检测糖基工程酵母宿主DNA残余的方法。结果:优化后的实时荧光定量PCR法检测灵敏度达10^-3 pg/μL,标准品DNA浓度为10^3~10^-3 pg/μL时具有很好的线性关系,R2值达0.9984。不同
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