【摘 要】
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目的构建一种新的、具有生物活性检测能力的人过氧化物酶体增殖物激活受体α(hPPARα)配体药物筛选细胞模型。方法采用Lipofectamine 2000将含人PPARα基因质粒phPPARα-IRES
【机 构】
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遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室,遵义医学院人体解剖学教研室,
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目的构建一种新的、具有生物活性检测能力的人过氧化物酶体增殖物激活受体α(hPPARα)配体药物筛选细胞模型。方法采用Lipofectamine 2000将含人PPARα基因质粒phPPARα-IRES2-EGFP、含人PPRE报告质粒ptk-PPRE×3-luc及内部对照质粒pRL-CMV共转染293T细胞,并对phPPARα-IRES2-EGFP转染效率进行流式细胞仪(FCM)分析;通过双荧光素酶报告基因法(DLR)检测不同浓度、不同时间阳性药物WY14643干预共转染细胞体系的荧光素酶表达活性;实验还换用RXRα激动剂全反式维甲酸(ATRA)干预,以评价该细胞模型反应的特异性;并用贝特类降脂药苯扎贝特、环丙贝特、氯贝丁酯对建立的药物筛选细胞模型进行应用能力评价。结果 FCM检测共转染293T细胞phPPARα-IRES2-EGFP质粒转染效率为68%;DLR检测WY14643干预该hPPARα药物筛选模型获得了理想的量-效、时-效关系结果,且该模型不能通过RXRα配体激动剂ATRA激活。苯扎贝特、环丙贝特、氯贝丁酯干预模型均呈现良好的量-效反应性,且反应强度存在差异(P<0.05)。结论成功构建了基于hPPARα为靶标的药物筛选细胞模型,为筛选具有生物活性的hPPARα配体激动剂新药提供了一种可靠的新平台。
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