【摘 要】
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为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术体系,
【机 构】
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东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨150030;黑龙江省农业科学院马铃薯研究所,黑龙江哈尔滨150086;东北农业大学资源与环境学院,黑龙江哈尔滨150030
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为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术体系,分析熔解曲线鉴定PVSO和PVSA株系.以马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)阳性样品为对照检测其特异性.应用PVSO和PVSA重组质粒分别建立标准曲线,检测接种PVSO和PVSA马铃薯品种尤金和冀张薯12号的5个部位PVS含量.另外,应用该体系检测来源于11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品验证其实用性.PVSO和PVSA扩增后熔解曲线分别在85.77～86.00℃和87.78 ～ 87.91℃出现特异峰,PVS阴性样品及PVX、PVY、PVM、PVA和PLRV阳性样品的熔解曲线均无上述特异峰.PVSO和PVSA的标准曲线重组质粒浓度分别在1.09×105～1.09×109拷贝/μL和1.26×105 ～ 1.26×109拷贝/μL时,荧光信号基线的循环数平均值(Cycle threshold,Ct值)与PVS病毒粒子拷贝数对数之间具有良好的线性关系(决定系数R2=0.994 2和0.991 2).尤金和冀张薯12号5个部位PVSO和PVSA拷贝数均大于107数量级,均可用于检测,以PVSO在叶柄中含量最高.11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品均可检测到.本研究建立的PVS RT-qPCR检测体系快速、准确、特异,并可依据样品熔解曲线鉴定PVSO和PVSA株系.叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎等5个部位组织均可用于检测,实用性强,可为生产脱毒种薯提供技术支持.
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说明: 我所生产的标样由武汉市生产资料服务公司,上海黄浦化学试剂商店、沈阳冶金产品标样经销部、成都冶金标样经销部(成都市人民中路)等单位代销,我所不办理销售业务。
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