【摘 要】
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目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢
【机 构】
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遵义医学院免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地,遵义医学院贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室,贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(NO:31370918);贵州省高层次创新型人才计划项目(NO:黔科合人才[2016]4031);贵州省应用基础研究计划重大专项(NO:黔科合J重大字[2015]2003);遵义医学院优秀青年人才计划项目(NO:15ZY-001)
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目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7(命名为p LV-miR-7)载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-time PCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10~7copies/mL;该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长(P<0.05)。结论成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。
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