探讨孕鼠补充牛磺酸对生长受限胎鼠脑组织Rho-ROCK信号通路活性及突触囊泡蛋白(synaptophysin,Syp)表达的影响。
方法18只Sprague-Dawley孕鼠随机分为正常对照组、胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)组和牛磺酸组,每组6只。FGR组和牛磺酸组通过孕期低蛋白饮食法建立FGR模型,牛磺酸组自妊娠第12天起至分娩补充牛磺酸300 mg/(kg·d)。各组孕鼠自然分娩后,采用逆转录-聚合酶链反应技术检测各组仔鼠脑组织Rho-ROCK信号通路中关键信号分子神经生长抑制因子A(neurite growth inhibitor-A,Nogo-A)、神经生长抑制因子受体(neurite growth inhibitor receptor,NgR)、Rho-A、ROCKⅡ mRNA的表达水平(n=24);采用Western印迹技术检测Nogo-A和NgR蛋白表达水平(n=12);采用免疫组织化学方法检测Nogo-A、NgR及Syp蛋白表达强度(n=18)。采用单因素方差分析及LSD-t检验进行统计学分析。
结果(1)mRNA表达水平:Nogo-A、NgR、Rho-A和ROCKⅡ mRNA在FGR组的表达分别为4.09±1.34、3.01±0.77、39.89±7.71和7.82±1.83,均高于正常对照组(分别为1.00±0.13、1.00±0.10、1.02±0.30和1.00±0.10,t值分别为4.735、5.204、7.682和10.675,P值均<0.05);牛磺酸组(分别为1.07±0.30、1.20±0.27,5.36±0.41和1.89±0.43)较FGR组降低(t值分别为4.645、4.690、6.687和9.485,P值均<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P值均>0.05)。(2)蛋白含量:Nogo-A和NgR蛋白含量在FGR组分别为1.51±0.09和0.31±0.05,在牛磺酸组分别为0.82±0.06和0.06±0.01,在正常对照组分别为1.04±0.10和0.09±0.12。FGR组高于正常对照组(t值分别为9.644和5.285,P值均<0.05)。牛磺酸组较FGR组降低(t值分别为14.163和5.825,P值均<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P值均>0.05)。(3)蛋白阳性表达情况:Nogo-A、NgR的阳性表达强度在FGR组分别为0.28±0.06和0.11±0.02,在牛磺酸组分别为0.10±0.02和0.04±0.01,在正常对照组分别为0.07±0.01和0.04±0.01。FGR组高于正常对照组(t值分别为9.778和7.645,P值均<0.05);牛磺酸组较FGR组降低(t值分别为8.679和7.413,P值均<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P值均>0.05)。Syp的阳性表达强度在FGR组为0.08±0.01,低于正常对照组(0.16±0.04,t=4.600,P<0.05);牛磺酸组(0.14±0.36)较FGR组升高(t=3.181,P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
结论孕鼠补充牛磺酸通过下调FGR胎鼠脑组织Rho-ROCK信号通路中关键信号分子的表达,促进神经再生及突触囊泡的发育。