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目的
建立永生化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)系并探讨永生化对HUVECs增殖、凋亡及成瘤性影响。
方法扩增并提取猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)和人端粒酶反转录酶催化亚基(hTERT)基因，反转录病毒载体介导感染HUVECs；筛选2周；聚合酶链反应(PCR)扩增后行琼脂糖凝胶电泳成像鉴定目的基因是否转入HUVECs；细胞计数法比较细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、裸鼠成瘤实验检测细胞恶性转化。
结果筛选出抗嘌呤霉素阳性克隆，SV40LT、hTERT成功转入HUVECs；永生化组细胞生长曲线上移，细胞增殖第5、6、7天，SV40LT永生化组及hTERT永生化组与HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05)，hTERT永生化组和HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05)；HUVECs组细胞总凋亡率为(11.2±0.9)%，SV40LT永生化组HUVECs总凋亡率为(3.4±0.4)%，hTERT永生化组HUVECs总凋亡率为(2.8±0.4)%，SV40LT永生化组、hTERT永生化组凋亡率均低于HUVECs组(均P<0.05)；两种永生化细胞株不具成瘤性。
结论SV40LT、hTERT基因能使HUVECs发生永生化，永生化HUVECs增殖能力增强，凋亡率下降，无恶性转化。