【摘 要】
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目的 在构建核转录因子-κB(NF-κB)通路报告基因模型后,研究竹节香附素A(RDA)抗炎的作用及其作用机制.方法 用双荧光素酶报告基因技术,以pNF-γappa B-Luc(pNF-κB-Luc)、pr
【机 构】
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长春中医药大学药学院,长春,130117
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目的 在构建核转录因子-κB(NF-κB)通路报告基因模型后,研究竹节香附素A(RDA)抗炎的作用及其作用机制.方法 用双荧光素酶报告基因技术,以pNF-γappa B-Luc(pNF-κB-Luc)、prL-tk质粒转染RAW 264.7细胞,脂多糖(LPS)为激活剂,构建靶向NF-κB通路的报告基因模型,RDA和吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)分别给药验证模型.空白组给予空白培养基,模型组给予含LPS的培养基,对照组给予含PDTC的培养基,实验组给予含RDA的培养基.用Western-blot技术检测RDA对细胞蛋白p65和IκBα表达的影响.结果 当LPS浓度为10μg·mL-1,转染试剂量为2μL时,成功构建靶向NF-κB通路的报告基因模型.RDA能够降低转染后细胞内p65和IκBα亚基的磷酸化,显著抑制NF-κB信号通路.结论 本文构建的模型具有快速、稳定、特异、高通量等特点,可用于抗炎活性成分筛选,确认RDA的抗炎机制与NF-κB通路有关.
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