【摘 要】
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本研究构建人同源盒基因(homeobox gene)HOXB4的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的HOXB4感染人脐带间充质干细胞后的变化.利用PCR扩增获得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭载体lenti-shut
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院血液科,青岛大学医学院附属医院中美干细胞中心,青岛大学医学院附属医院中心实验室
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本研究构建人同源盒基因(homeobox gene)HOXB4的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的HOXB4感染人脐带间充质干细胞后的变化.利用PCR扩增获得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭载体lenti-shuttle；运用4质粒慢病毒包装系统转染HEK293T细胞,48 h收获慢病毒lenti-HOXB4,并测定慢病毒滴度；将lenti-HOXB4感染人脐带间充质干细胞,在倒置荧光显微镜下观察细胞感染效果,确定最佳的病毒感染复数( MOI)；同时,利用RT-PCR、免疫荧光染色、CCK-8、流式细胞术检测HOXB4的表达情况及对细胞生长的影响.结果表明:利用四质粒共转染293T细胞,成功获得lenti-HOXB4,测定的病毒滴度为3 ×108TU/ml；当MOI为20时,lenti-HOXB4对人脐带间充质干细胞具有较高的转染效率,达80％以上；感染lenti-HOXB4的人脐带间充质干细胞,在mRNA和蛋白水平上均检测到了目的基因的表达,其能促进脐带间充质干细胞的增殖；流式细胞术检测结果显示,HOXB4基因并未明显影响间充质干细胞的表面标志.结论:成功获得带有HOXB4基因的慢病毒并实现在脐带间充质干细胞中表达,HOXB4基因能促进脐带间充质干细胞的大量增殖,并未明显影响脐带间充质干细胞表面标志的表达.
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