【摘 要】
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目的:建立优化的差示PCR体系,通过对转移潜能不同的人成骨肉瘤细胞系进行差示比较,获得人成骨肉瘤转移相关基因片段.方法:以低转移性人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607及由此筛选出
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所
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目的:建立优化的差示PCR体系,通过对转移潜能不同的人成骨肉瘤细胞系进行差示比较,获得人成骨肉瘤转移相关基因片段.方法:以低转移性人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607及由此筛选出的高转移亚系SOSP-M为研究对象,利用优化的差示PCR技术获得两细胞系mRNA的表达差异,选取差异明显、片段较长的条带回收并克隆后,经点杂交和Northern杂交排除假阳性,并进行测序和同源性分析.结果:获得满意的差示PCR反应参数,并以高敏感度荧光染料SYBRTMGREEN Ⅰ替代同位素放射自显影,改良了显示系统.以此为基础,得到了两条高转移亚系所特有的差异DNA片段,命名为MG1和MG2,测序后分析显示它们具有较长的开放读框,与Genebank和EMBL数据库已知基因比较无明显同源性.结论:优化了差示PCR反应体系;分离筛选出2个人成骨肉瘤转移基因片段,已向Genebank申请登录.本实验为骨肉瘤转移的机制研究奠定了实验基础.
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