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摘要：目的：分析亲子鉴定实验用于评估产前诊断中母体细胞污染研究情况。方法：选择2015年6月～2020年6月由于单基因遗传病且经产前诊断孕妇274例为研究样本，所有样本送往本检测单位检验。以超声监视为基础，开展羊膜穿刺术，提取羊水以及羊水细胞基因组DNA。针对于羊水细胞基因组DNA以和胎儿父母基因组DNA开展亲子鉴定实验。使用多重荧光PCR技术扩增基因组DNA，共计15个，短串联重复序列位点。在此之后依照分型结果判定是否存在MCC情况与MCC程度。结果：女胎儿122例、男胎儿152例，没有发现MCC。在此其中，证明先证者为新发型突变共计8例，其占据高风险家系的3.0%。测定胎儿性别特定遗传病基因型异常共计70例，占据总数的25.6%。回访共计242例，引产或者出生之后相关检查和产前诊断结果相同。结论：应用多重荧光PCR技术开展亲子鉴定实验，能够全面提示母体细胞针对于羊水细胞基因组DNA污染水平。进而实现确定胎儿独立个体身份与性别。这种方法对于提升产前诊断精准性来讲有着非常重要的现实意义。
关键词：母体细胞污染;亲子鉴定;产前诊断;羊水
【中图分类号】R714.52 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2020）12-217-01
现如今，临床通常应用绒毛穿刺取样术以及羊膜腔穿刺术用以开展产前诊断，获取腹内胎儿组织标本。上述有创性取样技术存在着母体细胞污染（MCC）的为影响母婴产前诊断结果精准性的重要因素。相关文献表明：工作人员技术水平、取样方案等等在一定程度上决定了单胎妊娠MCC发生概率。通常认为：绒毛穿刺取样术的MCC风险比羊膜腔穿刺羊水取样术要高。另文献证实：没有经过培养的孕中期羊水标本MCC发生概率约为9.4%左右[2]，而经过培养的羊水样本MCC发生率则为2.8%。
1.资料及方法
1.1一般資料
选择2015年6月～2020年6月由于单基因遗传病且经产前诊断孕妇274例为研究样本，所有样本送往本检测单位检验。所抽取样本为中期羊水，不存在可见性母血污染。另外抽取家庭成员外周血，经ED-TA处理，2ml/人。
1.2方法
外周血以及羊水细胞DNA提取应用Chelex-100法。使用紫外线分光光度计测定浓度以及吸光度（A260/A280≈1.8）。
应用Identifiler系统，针对于羊水和父母外周血基因组开展DNA扩增分析。内含15个常染色体STR基因座和1个性别牙釉质蛋白Amelogenin基因座实现分型。后完成PCR产物检测以及结果分析。检测敏感性实验为：针对于已知的等位基因分型4对亲生母子8份血液样本提纯DNA在，开展浓度和A260/A280测定，经过应用母亲污染胎儿DNA样本，生成混合基因组DNA，混合样本模拟2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、30.0%、40.0%MCC水平，稀释至0.5ng/μL，完成体系扩增，评价此法监测MCC敏感度。
2.结果
经过亲子鉴定，结果表明：女胎儿122例、男胎儿152例，没有发现MCC。在此其中，证明先证者为新发型突变共计8例，其占据高风险家系的3.0%。测定胎儿性别特定遗传病基因型异常共计70例，占据总数的25.6%。回访共计242例，引产或者出生之后相关检查和产前诊断结果相同。
3.讨论
亲子鉴定技术为荧光标记技术以及多重PCR技术的有效结合。这种技术可实现于一个单管内同时扩张多个人类短串链重复序列基因座，其也被称之为微卫星DNA。该项技术的主要特点为多态性高、片段短、基因座多。其在法医学亲子鉴定以及人类起源与进化、个体识别、遗传疾病诊断中有着非常广泛的应用价值。本实验应用法医亲子鉴定Identifiler系统针对于产前诊断过程中MCC程度实现筛查。相关研究表明：产前羊水样本内普遍存在MCC。在此其中又有0.3%-1.3%的羊水样本污染比例达到了20%左右[2]。
本实验应用的Identifiler系统择取共计16个STR基因座鉴定体系，其主要将检测灵敏度>5%以上污染比例为基准，应用此法显著高于使用M LP A以及Sanger测序法所得出的敏感性。其能够取得有效排除MCC干扰的目的。本实验将单基因遗传病家系为研究样本，针对于274例无肉眼可见性母血污染羊水样本开展了MCC筛查工作，结果表明：未出现MCC污染情况。本次实验所得出的结果和同类报导有所不同。由此发现：本实验所用的方法能够在一定程度上减少MCC风险，但出现这种结果的原因也可能和本实验内所纳入的样本数量过少有关。
本试验共计测定274例产前诊断人员。在此其中，常染色体隐性遗传病共计168例;其次是x连锁遗传，共计74例;再次为显性遗传病例，共计32例。经过使用亲子鉴定技术测定产前诊断样本MCC污染所测定到的非正常胎儿基因型共计70例，受检夫妇均选择终止妊娠。在此其中有62例接受了引产后保留脐带血进行复查，结果和产前所出具的结果相同;204例为隐性携带者或者正常者，随访后出生未发现新生儿存在相关疾病。其中180例进行了脐带血复查工作，相关结果和产前一致。
另外，针对于先证者和父母开展加强筛查时发现共计8例先证者基因型不符合孟德尔遗传定律。通过开展亲子鉴定实验表明：其存在新生性血缘关系。出现这种结果的原因很可能和先证者属于新发突变有关。相同的新发变异也可能在孕妇下一次妊娠中复发，同时导致下一个子女也受到这种情况影响。以上两者有着非常高的相关性。所以，有必要对于此类复发性风险开展合理评估，同时针对于孕妇和家属做好告知工作。
参考文献
[1]卢莎，王昊，梁丹军，任杰，胡文胜.产前诊断样本中母体细胞污染对染色体微阵列技术检测的影响[J].中华检验医学杂志，2020（02）：153-154-155-156-157-158-159.
[2]尹爱华，张畅斌，梁驹卿，潘小英，吴菁，麦明琴.应用复合荧光标记STR-PCR排除绒毛取材中母体细胞污染[J].中山大学学报（医学科学版），2007（S1）：203-205.
作者简介：沈祥，1988年12月，男，汉江苏盐城，本科，职称：研究员研究方向：亲子鉴定，基因检测。
南京东南司法鉴定中心 210018
关键词：母体细胞污染;亲子鉴定;产前诊断;羊水
【中图分类号】R714.52 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2020）12-217-01
现如今，临床通常应用绒毛穿刺取样术以及羊膜腔穿刺术用以开展产前诊断，获取腹内胎儿组织标本。上述有创性取样技术存在着母体细胞污染（MCC）的为影响母婴产前诊断结果精准性的重要因素。相关文献表明：工作人员技术水平、取样方案等等在一定程度上决定了单胎妊娠MCC发生概率。通常认为：绒毛穿刺取样术的MCC风险比羊膜腔穿刺羊水取样术要高。另文献证实：没有经过培养的孕中期羊水标本MCC发生概率约为9.4%左右[2]，而经过培养的羊水样本MCC发生率则为2.8%。
1.资料及方法
1.1一般資料
选择2015年6月～2020年6月由于单基因遗传病且经产前诊断孕妇274例为研究样本，所有样本送往本检测单位检验。所抽取样本为中期羊水，不存在可见性母血污染。另外抽取家庭成员外周血，经ED-TA处理，2ml/人。
1.2方法
外周血以及羊水细胞DNA提取应用Chelex-100法。使用紫外线分光光度计测定浓度以及吸光度（A260/A280≈1.8）。
应用Identifiler系统，针对于羊水和父母外周血基因组开展DNA扩增分析。内含15个常染色体STR基因座和1个性别牙釉质蛋白Amelogenin基因座实现分型。后完成PCR产物检测以及结果分析。检测敏感性实验为：针对于已知的等位基因分型4对亲生母子8份血液样本提纯DNA在，开展浓度和A260/A280测定，经过应用母亲污染胎儿DNA样本，生成混合基因组DNA，混合样本模拟2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、30.0%、40.0%MCC水平，稀释至0.5ng/μL，完成体系扩增，评价此法监测MCC敏感度。
2.结果
经过亲子鉴定，结果表明：女胎儿122例、男胎儿152例，没有发现MCC。在此其中，证明先证者为新发型突变共计8例，其占据高风险家系的3.0%。测定胎儿性别特定遗传病基因型异常共计70例，占据总数的25.6%。回访共计242例，引产或者出生之后相关检查和产前诊断结果相同。
3.讨论
亲子鉴定技术为荧光标记技术以及多重PCR技术的有效结合。这种技术可实现于一个单管内同时扩张多个人类短串链重复序列基因座，其也被称之为微卫星DNA。该项技术的主要特点为多态性高、片段短、基因座多。其在法医学亲子鉴定以及人类起源与进化、个体识别、遗传疾病诊断中有着非常广泛的应用价值。本实验应用法医亲子鉴定Identifiler系统针对于产前诊断过程中MCC程度实现筛查。相关研究表明：产前羊水样本内普遍存在MCC。在此其中又有0.3%-1.3%的羊水样本污染比例达到了20%左右[2]。
本实验应用的Identifiler系统择取共计16个STR基因座鉴定体系，其主要将检测灵敏度>5%以上污染比例为基准，应用此法显著高于使用M LP A以及Sanger测序法所得出的敏感性。其能够取得有效排除MCC干扰的目的。本实验将单基因遗传病家系为研究样本，针对于274例无肉眼可见性母血污染羊水样本开展了MCC筛查工作，结果表明：未出现MCC污染情况。本次实验所得出的结果和同类报导有所不同。由此发现：本实验所用的方法能够在一定程度上减少MCC风险，但出现这种结果的原因也可能和本实验内所纳入的样本数量过少有关。
本试验共计测定274例产前诊断人员。在此其中，常染色体隐性遗传病共计168例;其次是x连锁遗传，共计74例;再次为显性遗传病例，共计32例。经过使用亲子鉴定技术测定产前诊断样本MCC污染所测定到的非正常胎儿基因型共计70例，受检夫妇均选择终止妊娠。在此其中有62例接受了引产后保留脐带血进行复查，结果和产前所出具的结果相同;204例为隐性携带者或者正常者，随访后出生未发现新生儿存在相关疾病。其中180例进行了脐带血复查工作，相关结果和产前一致。
另外，针对于先证者和父母开展加强筛查时发现共计8例先证者基因型不符合孟德尔遗传定律。通过开展亲子鉴定实验表明：其存在新生性血缘关系。出现这种结果的原因很可能和先证者属于新发突变有关。相同的新发变异也可能在孕妇下一次妊娠中复发，同时导致下一个子女也受到这种情况影响。以上两者有着非常高的相关性。所以，有必要对于此类复发性风险开展合理评估，同时针对于孕妇和家属做好告知工作。
参考文献
[1]卢莎，王昊，梁丹军，任杰，胡文胜.产前诊断样本中母体细胞污染对染色体微阵列技术检测的影响[J].中华检验医学杂志，2020（02）：153-154-155-156-157-158-159.
[2]尹爱华，张畅斌，梁驹卿，潘小英，吴菁，麦明琴.应用复合荧光标记STR-PCR排除绒毛取材中母体细胞污染[J].中山大学学报（医学科学版），2007（S1）：203-205.
作者简介：沈祥，1988年12月，男，汉江苏盐城，本科，职称：研究员研究方向：亲子鉴定，基因检测。
南京东南司法鉴定中心 210018