【摘 要】
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目的:探讨产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的意义,为该检测体系的临床应用提供可靠的技术依据。方法:将O139群霍乱弧菌灭
【机 构】
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卫生部北京医院卫生部临床检验中心卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室,
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目的:探讨产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的意义,为该检测体系的临床应用提供可靠的技术依据。方法:将O139群霍乱弧菌灭活菌株悬液[1.0×1010cfu(菌落形成单位)/ml]连续10倍稀释后与健康成人新鲜粪便混匀,制备成5.0×101~5.0×108cfu/g梯度浓度的模拟带菌者粪便标本并提取DNA,用以评价我们自行建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的敏感度、特异性和稳定性。结果:实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的模拟带菌者粪便标本的检测敏感度为1.0×103cfu每反应体系(5.0×104cfu/g),其线性检测范围是1.0×103~1.0×107cfu每反应体系;在稳定性评价中,对1.0×103~1.0×107cfu模拟带菌者粪便标本DNA进行3次重复检测的结果显示,ctxA基因扩增反应Ct值的变异系数为1.40%~4.10%,rfb-O139基因扩增反应Ct值的变异系数为0.04%~2.08%;在特异性评价中,3名健康成人新鲜粪便标本的阴性对照均未见特异性扩增曲线。结论:我们建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可用于O139群霍乱弧菌临床粪便标本的检测。
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