【摘 要】
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目的:克隆构建表达人雌激素受体α(ERα)的真核表达质粒,并探讨通过质粒免疫的方法制备ERα抗体的可行性。方法:利用RT-PCR方法从MCF-7细胞中克隆出ERα基因,并将其构建在pCD
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院生殖医学科,生殖医学国家重点实验室临床研究中心; 南京农业大学食品科技学院生物工程系; 南京医科大学病原生物学系;
【基金项目】
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江苏省科技厅临床医学科技专项(BL2012009);卫生厅科技兴卫工程(ZX201110)
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目的:克隆构建表达人雌激素受体α(ERα)的真核表达质粒,并探讨通过质粒免疫的方法制备ERα抗体的可行性。方法:利用RT-PCR方法从MCF-7细胞中克隆出ERα基因,并将其构建在pCDNA3.1载体中,质粒经鉴定为正确后,大量提取重组质粒,利用脂质体转染试剂包裹,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过测定血清抗ERα效价,观察重组质粒携带ERα在小鼠体内的表达情况。结果:成功克隆构建了表达ERα的真核载体,细胞内瞬时转染实验证实重组质粒成功表达目的蛋白;通过采用该质粒免疫小鼠,获得了高效价的小鼠多克隆抗体,经验证抗体可识别内源性ERα。结论:采用真核表达质粒进行免疫制备ERα抗体具有可行性,为进一步通过质粒免疫制备ERα单克隆抗体奠定基础。
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