【摘 要】
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目的检测切应力诱导人脐静脉血管内皮细胞白介素-8(IL-8)基因表达,探讨其转录激活机制.方法选用4.2 dyne/cm2层流低切应力刺激细胞.采用RT-PCR检测切应力刺激后内皮细胞IL-8
【机 构】
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四川大学华西医学中心基础医学院感染血疫室,成都,610041四川大学华西医学中心基础医学院生物医学工程研究所,成都,610041;
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目的检测切应力诱导人脐静脉血管内皮细胞白介素-8(IL-8)基因表达,探讨其转录激活机制.方法选用4.2 dyne/cm2层流低切应力刺激细胞.采用RT-PCR检测切应力刺激后内皮细胞IL-8 mRNA表达情况.同时构建IL-8上游调控序列(IL-8 USCS)的绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1-IL8USCS,通过转基因和流式细胞术检测切应力诱导IL-8基因的转录激活.用免疫荧光细胞化学染色观察NF-κB核转移情况.免疫印迹检测切应力诱导IκB的磷酸化和降解.用RT-PCR、Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色在mRNA和蛋白水平检测Toll-样受体-4(TLR-4)的表达.结果用切应力刺激120 min后,内皮细胞表达IL-8 mRNA明显增强.切应力刺激180 min后pEGFP1-IL8USCS转染的血管内皮细胞绿色荧光蛋白表达显著增强.NF-κB 5免疫荧光细胞化学染色显示,切应力刺激30 min,胞核即出现阳性反应,刺激90 min后,胞核呈强阳性染色.切应力刺激10 min时磷酸化IκB即显著增强,60 min后磷酸化IκB印迹强度降到无,而IκB随刺激时间延长而逐渐降低.脐静脉血管内皮细胞表面表达Toll样受体-2(TLR-2)和TLR-4受体,当切应力刺激60 min后,TLR-4 mRNA表达明显增强.结论流体切应力刺激血管内皮细胞表达IL-8基因与NF-κB活化有关,天然免疫受体Toll可能介导这一反应过程.
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