【摘 要】
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目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路在胎盘生长因子1(PLGF-1)诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放一氧化氮(NO)中的作用.方法 选择因头盆不称、胎儿窘迫或胎位异常行剖宫产
【机 构】
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北京市海淀区妇幼保健院产科,华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
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目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路在胎盘生长因子1(PLGF-1)诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放一氧化氮(NO)中的作用.方法 选择因头盆不称、胎儿窘迫或胎位异常行剖宫产分娩的新生儿50例,采用胰蛋白酶消化法进行脐带HUVEC原代培养.(1)培养成功后.用免疫组化法通过Ⅷ因子鉴定细胞形态;(2)用蛋白印迹法和RT-PCR技术检测HUVEC中酪氨酸激酶受体1(Fit-1)蛋白和mRNA表达;(3)用浓度为10 ng/ml的PLGF-1培养细胞(观察A组),并在培养前及培养后2.5、5、10、20 min收集细胞,提取蛋白,用蛋白印迹法检测ERK蛋白的表达;(4)用浓度为10 ng/ml的PLGF-1培养细胞,收集培养后20、40、160、360、480、720、1440 min的细胞培养液,用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量;(5)先用含ERK特异性抑制剂--PD98059(100μmo/L)的培养基培养细胞60 min后,换含PLGF-1的培养基继续培养(观察B组),收集培养后20、40、160、360、480、720、1440 min的细胞培养液,用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量.以无血清培养基培养的细胞为对照组,细胞处理时间、培养条件和收集细胞液时间同观察组.实验重复3次.结果 (1)免疫组化鉴定培养的细胞为HUVEC.(2)HUVEC中有Fit-1 mRNA和蛋白的表达.(3)观察A组PLGF-l培养HUVEC后2.5 min即有ERK蛋白表达强度的升高,5 min时表达强度达到高峰,10 min时表达强度降低.(4)PLGF-l培养20 min后HUVEC培养液中NO含量开始升高,为(6.96±0.34)μmol/L,培养40 min时NO含量为(9.45 4-0.59)μmol/L,培养360 min时NO达(15.82±0.69)μmo/L,各时间点NO含量比较,差异均有统计学意义(P
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