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【摘要】本实验拟研究元宝枫籽油对小鼠免疫功能的影响。采用0.33、0.67、1.00g/kg BW/剂量的元宝枫籽油给小鼠经口灌胃30d，分别测定免疫器官脏器/体重比值，进行迟发型变态反应、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、抗体生成细胞检测、半数溶血值测定、小鼠碳廓清实验和NK细胞活性的测定。结果：与阴性对照组比较，实验组能明显提高小鼠的遲发型变态反应能力，能明显提高胸腺体重比值、小鼠抗体生成细胞数、半数溶血值，明显增强小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力，明显提高小鼠NK细胞活性，结论：元宝枫籽油具有潜在增强免疫力的作用。
【关键词】元宝枫籽油;脏器/体重比值;碳廓清能力;NK细胞活性;免疫功能
元宝枫籽油是一种新资源食品，是由中国特有树种元宝枫的种子加工而成的植物油脂。元宝枫籽油富含多种脂溶性维生素、矿质营养元素、类胡萝卜素和人体必须氨基酸，且脂肪酸组成中含有5%-7%的神经酸，而含神经酸植物在自然界中分布较少，元宝枫是可持续利用的神经酸新资源。元宝枫籽油具有防止神经纤维萎缩、脑细胞衰老、心血管病等的功效，对增强人体体质和消化功能有良好的作用，关于其免疫调节作用少见报导。本研究以小鼠为研究对象，意在探究元宝枫籽油对小鼠免疫功能的影响，为开发元宝枫资源提供新思路。
1、材料与方法
1.1 受试物
元宝枫籽油由昆明海之灵生物科技开发有限公司提供。实验时以色拉油为溶剂，将样品配制成所需浓度的溶液灌胃。
1.2 试验动物
昆明小鼠：体重（20±2）g，6～8周龄，200只（由河北省实验动物中心提供）。
1.3 剂量选择
实验设3个剂量组：0.33g/kg BW、0.67g/kg BW、1.00g/kg BW以及溶剂（色拉油）对照组。小鼠灌胃体积为0.2ml/kg BW。
1.4 主要仪器与试剂
打孔器、显微镜、微量血凝试验板、离心机、酶标仪、96孔培养板、5%CO2培养箱、200目筛网、注射用墨汁、721型分光光度计。
色拉油、刀豆蛋白A（ConA）、MTT、DNFB、丙酮、麻油、脱毛剂、SRBC、生理盐水、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液、YAC-1细胞、Hanks液 （pH7.2～7.4）、RPMI1640完全培养液、1%NP40、台盼兰、lmol/L盐酸等。
1.5 试验方法
据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中增强免疫力功能检验方法。实验设4个组，包括3个剂量组和1个对照组。采用灌胃法，每天以0.2ml/kg BW的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物，溶剂对照组给予等量色拉油。每天1次，连续30d。末次给样l h以后进行各项免疫指标的测定。
1.6 测定指标
碳廓清实验和脏器/体重比值测定、迟发型变态反应（DTH）、半数溶血值（HC50）测定、抗体牛成细胞检测（Jerne改良玻片法）、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠NK细胞活性的测定（乳酸脱氡酶LDH测定法）。
1.7 实验数据统计
应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。
2、结果与分析
2.1 元宝枫籽油对小鼠脏器/体重比的影响
由表1可知，经方差分析，三个剂量组的脾脏/体重比值以及胸腺/体重比值与对照组比较，均无统计学意义（P>0.05）。
表1 元宝枫籽油对小鼠脏器/体重比的影响（±s）
剂量 动物数 脾脏/体重 胸腺/体重
（g/kg BW） （只） （%） （%）
0 10 0.404±0.042 0.186±0.040
0.33 10 0.412±0.042 0.195±0.021
0.67 10 0.414±0.045 0.183±0.029
1.00 10 0.439±0.045 0.193±0.019
注：*与对照组比较，P <0.05。下同。
2.2 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响
由表2可知。 经方差分析，三个剂量组的淋巴细胞增殖实验的OD值与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。左右耳肿重量差值与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表2 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 淋巴细胞增殖能力 左右耳肿重量差值
（g/kg BW） （只） （OD值） （mg）
0 10 0.150±0.024 6.80±1.69
0.33 10 0.182±0.026* 7.09±10.1
0.67 10 0.188±0.017* 7.22±1.88
1.00 10 0.190±0.033* 8.93±1.70*
2.3 元宝枫籽油对小鼠体液免疫功能的影响
由表3可知。 经方差分析，三个剂量组的溶血空斑数与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。半数溶血值与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表3 元宝枫籽油对小鼠体液免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 溶血空斑数 半数溶血值
（g/kg BW） （只） （个/106脾细胞） 0 10 166.8±36.7 126.3±26.2
0.33 10 197.3±58.4* 142.7±23.2
0.67 10 217.8±55.1* 144.8±29.3
1.00 10 238.5±41.0* 159.3±28.6*
2.4 元寶枫籽油对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
由表4可知。 经方差分析，碳廓清实验的吞噬指数与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
（下转第页）
（上接第页）三个剂量组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力与对照组比较，吞噬率与吞噬指数结果无统计学意义（P>0.05）。
表4 元宝枫籽油对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响（±s）
剂量 动物数 碳廓清实验 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力
（g/kg BW） （只） 吞噬指数 吞噬率（%） 吞噬指数
0 10 5.90±1.18 15.36±5.08 0.31±0.14
0.33 10 6.37±1.39 16.81±6.17 0.37±0.14
0.67 10 7.12±1.29 16.88±5.83 0.42±0.10
1.00 10 7.52±1.44* 17.65±4.85 0.43±0.09
2.5 元宝枫籽油对小鼠NK细胞活性的影响
由表5可知。 经方差分析左右耳肿重量差值与对照组比较，0.67、1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），0.33g/kg BW剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表5 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 NK细胞活性
（g/kg BW） （只） （%）
0 10 31.69±5.69
0.33 10 36.41±4.81
0.67 10 43.12±5.99*
1.00 10 47.22±5.31*
3、结论与讨论
三个剂量组的元宝枫籽油均不能提高脏器/体重比值;脾淋巴细胞转化实验呈阳性结果，迟发型变态反应实验表明，1.00g/kg BW剂量组与对照组比较有显著差异，呈阳性结果;小鼠体液免疫功能实验表明，在抗体生成细胞实验中，与对照组相比，三个剂量组元宝枫籽油使脾细胞溶血空斑数显著升高，呈阳性结果;小鼠半数溶血值测定表明，1.00g/kg BW剂量组与对照组比较有显著差异，呈阳性结果;小鼠单核-巨噬细胞功能实验结果表明，在小鼠碳廓清实验中，1.00g/kg BW剂量组的吞噬指数显著高于对照组，呈阳性结果;小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验表明，三个剂量组的元宝枫籽油均不能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力;NK 细胞活性测定实验表明，与对照组比较，0.67、1.00g/kg BW剂量组NK细胞的活性显著升高，呈阳性结果。
免疫力低下是城市人群中普遍存在的一种亚健康状态，是多数感染类疾病的诱因，严重影响着人们的身体健康。在快节奏的社会状态下，多数上班族无法优化饮食和睡眠，通过服用保健品来调节自身的免疫状态是比较便捷有效的方法。元宝枫籽油是从云南元宝枫果实中提炼出来的纯天然植物油，它富含油酸、亚油酸、神经酸等多种不饱和脂肪酸，丰富的维生素E等脂溶性维生素。
本实验结果表明元宝枫籽油可以通过提高机体细胞免疫和体液免疫的双重作用而增强机体免疫力，元宝枫籽油可作为开发增强免疫力产品提供潜在的新资源。而生物学作用机理，则有待进一步研究，使其得到更好地开发。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部公告20011年第9号.
[2] 王性炎，王姝清.神经酸新资源—元宝枫油[J].中国油脂，2005，30（ 9 ）：62-64.
[3] 王兰珍，马希汉，王姝清.元宝枫研究进展[J].西北林学院学报，1998，13（1）：96-100.
[4] 吴卫中，李珺，许疌.元宝枫化学成分的研究概况[J].中国药事，2008，22（7）：603-609.
[5] 王熙才，左曙光，邱宗海等.艾舍尔软胶囊增强小鼠免疫力的实验研究[J].昆明医学院学报2008，（6）：71-75.
【关键词】元宝枫籽油;脏器/体重比值;碳廓清能力;NK细胞活性;免疫功能
元宝枫籽油是一种新资源食品，是由中国特有树种元宝枫的种子加工而成的植物油脂。元宝枫籽油富含多种脂溶性维生素、矿质营养元素、类胡萝卜素和人体必须氨基酸，且脂肪酸组成中含有5%-7%的神经酸，而含神经酸植物在自然界中分布较少，元宝枫是可持续利用的神经酸新资源。元宝枫籽油具有防止神经纤维萎缩、脑细胞衰老、心血管病等的功效，对增强人体体质和消化功能有良好的作用，关于其免疫调节作用少见报导。本研究以小鼠为研究对象，意在探究元宝枫籽油对小鼠免疫功能的影响，为开发元宝枫资源提供新思路。
1、材料与方法
1.1 受试物
元宝枫籽油由昆明海之灵生物科技开发有限公司提供。实验时以色拉油为溶剂，将样品配制成所需浓度的溶液灌胃。
1.2 试验动物
昆明小鼠：体重（20±2）g，6～8周龄，200只（由河北省实验动物中心提供）。
1.3 剂量选择
实验设3个剂量组：0.33g/kg BW、0.67g/kg BW、1.00g/kg BW以及溶剂（色拉油）对照组。小鼠灌胃体积为0.2ml/kg BW。
1.4 主要仪器与试剂
打孔器、显微镜、微量血凝试验板、离心机、酶标仪、96孔培养板、5%CO2培养箱、200目筛网、注射用墨汁、721型分光光度计。
色拉油、刀豆蛋白A（ConA）、MTT、DNFB、丙酮、麻油、脱毛剂、SRBC、生理盐水、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液、YAC-1细胞、Hanks液 （pH7.2～7.4）、RPMI1640完全培养液、1%NP40、台盼兰、lmol/L盐酸等。
1.5 试验方法
据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中增强免疫力功能检验方法。实验设4个组，包括3个剂量组和1个对照组。采用灌胃法，每天以0.2ml/kg BW的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物，溶剂对照组给予等量色拉油。每天1次，连续30d。末次给样l h以后进行各项免疫指标的测定。
1.6 测定指标
碳廓清实验和脏器/体重比值测定、迟发型变态反应（DTH）、半数溶血值（HC50）测定、抗体牛成细胞检测（Jerne改良玻片法）、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠NK细胞活性的测定（乳酸脱氡酶LDH测定法）。
1.7 实验数据统计
应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。
2、结果与分析
2.1 元宝枫籽油对小鼠脏器/体重比的影响
由表1可知，经方差分析，三个剂量组的脾脏/体重比值以及胸腺/体重比值与对照组比较，均无统计学意义（P>0.05）。
表1 元宝枫籽油对小鼠脏器/体重比的影响（±s）
剂量 动物数 脾脏/体重 胸腺/体重
（g/kg BW） （只） （%） （%）
0 10 0.404±0.042 0.186±0.040
0.33 10 0.412±0.042 0.195±0.021
0.67 10 0.414±0.045 0.183±0.029
1.00 10 0.439±0.045 0.193±0.019
注：*与对照组比较，P <0.05。下同。
2.2 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响
由表2可知。 经方差分析，三个剂量组的淋巴细胞增殖实验的OD值与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。左右耳肿重量差值与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表2 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 淋巴细胞增殖能力 左右耳肿重量差值
（g/kg BW） （只） （OD值） （mg）
0 10 0.150±0.024 6.80±1.69
0.33 10 0.182±0.026* 7.09±10.1
0.67 10 0.188±0.017* 7.22±1.88
1.00 10 0.190±0.033* 8.93±1.70*
2.3 元宝枫籽油对小鼠体液免疫功能的影响
由表3可知。 经方差分析，三个剂量组的溶血空斑数与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。半数溶血值与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表3 元宝枫籽油对小鼠体液免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 溶血空斑数 半数溶血值
（g/kg BW） （只） （个/106脾细胞） 0 10 166.8±36.7 126.3±26.2
0.33 10 197.3±58.4* 142.7±23.2
0.67 10 217.8±55.1* 144.8±29.3
1.00 10 238.5±41.0* 159.3±28.6*
2.4 元寶枫籽油对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
由表4可知。 经方差分析，碳廓清实验的吞噬指数与对照组比较，1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），另外两个剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
（下转第页）
（上接第页）三个剂量组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力与对照组比较，吞噬率与吞噬指数结果无统计学意义（P>0.05）。
表4 元宝枫籽油对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响（±s）
剂量 动物数 碳廓清实验 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力
（g/kg BW） （只） 吞噬指数 吞噬率（%） 吞噬指数
0 10 5.90±1.18 15.36±5.08 0.31±0.14
0.33 10 6.37±1.39 16.81±6.17 0.37±0.14
0.67 10 7.12±1.29 16.88±5.83 0.42±0.10
1.00 10 7.52±1.44* 17.65±4.85 0.43±0.09
2.5 元宝枫籽油对小鼠NK细胞活性的影响
由表5可知。 经方差分析左右耳肿重量差值与对照组比较，0.67、1.00g/kg BW剂量组有显著性差异（P<0.05），0.33g/kg BW剂量组结果无统计学意义（P>0.05）。
表5 元宝枫籽油对小鼠细胞免疫功能的影响（±s）
剂量 动物数 NK细胞活性
（g/kg BW） （只） （%）
0 10 31.69±5.69
0.33 10 36.41±4.81
0.67 10 43.12±5.99*
1.00 10 47.22±5.31*
3、结论与讨论
三个剂量组的元宝枫籽油均不能提高脏器/体重比值;脾淋巴细胞转化实验呈阳性结果，迟发型变态反应实验表明，1.00g/kg BW剂量组与对照组比较有显著差异，呈阳性结果;小鼠体液免疫功能实验表明，在抗体生成细胞实验中，与对照组相比，三个剂量组元宝枫籽油使脾细胞溶血空斑数显著升高，呈阳性结果;小鼠半数溶血值测定表明，1.00g/kg BW剂量组与对照组比较有显著差异，呈阳性结果;小鼠单核-巨噬细胞功能实验结果表明，在小鼠碳廓清实验中，1.00g/kg BW剂量组的吞噬指数显著高于对照组，呈阳性结果;小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验表明，三个剂量组的元宝枫籽油均不能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力;NK 细胞活性测定实验表明，与对照组比较，0.67、1.00g/kg BW剂量组NK细胞的活性显著升高，呈阳性结果。
免疫力低下是城市人群中普遍存在的一种亚健康状态，是多数感染类疾病的诱因，严重影响着人们的身体健康。在快节奏的社会状态下，多数上班族无法优化饮食和睡眠，通过服用保健品来调节自身的免疫状态是比较便捷有效的方法。元宝枫籽油是从云南元宝枫果实中提炼出来的纯天然植物油，它富含油酸、亚油酸、神经酸等多种不饱和脂肪酸，丰富的维生素E等脂溶性维生素。
本实验结果表明元宝枫籽油可以通过提高机体细胞免疫和体液免疫的双重作用而增强机体免疫力，元宝枫籽油可作为开发增强免疫力产品提供潜在的新资源。而生物学作用机理，则有待进一步研究，使其得到更好地开发。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部公告20011年第9号.
[2] 王性炎，王姝清.神经酸新资源—元宝枫油[J].中国油脂，2005，30（ 9 ）：62-64.
[3] 王兰珍，马希汉，王姝清.元宝枫研究进展[J].西北林学院学报，1998，13（1）：96-100.
[4] 吴卫中，李珺，许疌.元宝枫化学成分的研究概况[J].中国药事，2008，22（7）：603-609.
[5] 王熙才，左曙光，邱宗海等.艾舍尔软胶囊增强小鼠免疫力的实验研究[J].昆明医学院学报2008，（6）：71-75.