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［摘 要］ 目的 探讨急性冠状动脉综合征(acute coronary syndro me, ACS)患者外周血单核细胞核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)活性的变化及 其临床意见。方法 分别采用免疫组织化学染色法和夹心酶联免疫吸附法 测定54例ACS，42例稳定型冠心病(SCHD)患者及36例对照组的外周血单核细胞NF-κB活性和 血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平，并分析NF-κB活性与sICAM-1浓度相关性。结果 ASC组NF-κB活性和sICAM-1水平显著高于稳定型冠心病组和对照组( P＜0.01)，而且ACS血NF-κB活性与sICAM-1水平显著正相关。但SCHD组NF-κB活性和sIC AM-1水平与对照组比较，差异无显著性意义。结论 急性冠状动脉综合征 外周血单核细胞核因子-κB活性明显升高，NF-κB是动脉粥样斑块不稳定的标志，并可能通 过上调sICAM-1表达而促发ACS。
［关键词］ 急性冠状动脉综合征；核因子-κB；可溶性细胞间黏附分 子-1
中图分类号：R541.4
文献标识 码：A
文章编号：1009-816X(2007)02-0299-03
The Clinical Significance of Changes of the Activity of Peripheral Bl ood Mononuclear Cell NF-κB in Acute Coronary Syndrome. TANG Xiao-fan g, WANG Qiang, WANG Yin. Zhejiang Hospital, Zhejiang 310013, China
［Abstract］ Objective To investigate the clinical significance of changes of the activity of peripheral blood mononuclear cell NF-κB in acute coronary syndrome (ACS). Methods Enzyme-linked immunosorbent ass ay was used to measure the plasma soluble intercellular adhesion molecule-1 (sIC AM-1) and immunohistochemical method was used to measure activity of NF-κB in p e ripheral blood mononuclear cell in 58 patients with ACS, 48 stable coronary hear t disease (SCHD) and 30 normal control subjects. At the same time linear correl ation analysis was used to analyze the correlation between the level of sICAM-1 and the level of activity of NF-κB. Results The level of activi ty of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells and the plasma sICAM-1 cocent ration were significantly higher in patients with ACS than in the controls and i n patients with SCHD. The level of plasma sICAM-1 was positively correlated with activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells. There was no signific ant difference in levels of activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear c ell and the plasma sICAM-1 concentration between the controls and the patients w ith SCHD. Conclusions The activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells is significantly elevated in ACS. It is a potential marker of plaque unstability and may induce ACS via up-regulating sICAM-1 expression.
［Key words］ Acute coronary syndrome; Activity of NF-κB; Plasm a soluble intercellular adhesion molecule-1
近来，随着对急性冠状动脉综合征(ACS)研究的不断深入，发现炎症在ACS的发病机制中起着 重要作用，而核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB NF-κB)作为一种炎症反应调 节因子，一直被认为是一种主要的冠状动脉粥样硬化发生发展的因子［1］。本研究 分别采用夹心酶联免疫吸附法和免疫组织化学染色法测定54例ACS，42例稳定性冠心病(SCHD )患者及36例对照组的外周血单核细胞NF-κB活性及血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1) 水平。旨在探讨ACS患者单核细胞NF-κB活性的变化及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选择2005年5月至2006年9月在本院心内科门诊或住院的冠心病(CHD)患者9 6例，其中男57例，女39例，年龄39～78岁，平均年龄54.5±9.1岁。CHD患者分为二个亚 组，即ACS组54例，包括急性心肌梗死(AMI)患者25例，不稳定性心绞痛(UAP)患者29例；SCH D组42例。对照组为同期来本院参加体检者：无CHD病史，心电图检查无缺血性改变。其中男 21例，女15例，年龄41～76岁，平均年龄57.8±9.3岁。
另外，所有研究对象必须排除合并未控制的高血压、合并感染性疾病，甲状腺疾病，风湿性 疾病、肿瘤、全身免疫性疾病、严重肝肾功能不全、糖尿病、高热及应用炎症抑制药物如非 固醇类消炎镇痛药、类固醇和鸦片类药等，均予剔除。两组间年龄、性别、吸烟史、血压 、体重指数比较，无显著性差异(P＞0.05)。
1.2 方法：
1.2.1 所有研究对象均于门诊当日或入院次日采集空腹肝素抗凝静脉血10ml，分成2ml和 8ml两部分，2ml抗凝血摇匀，3500r/min离心5min，取上清液保存于-70℃冰箱待测。采用夹 心酶联免疫吸附测定法测定sICAM-1，其试剂盒为奥地利Bender公司产品，严格按说明书 操作。另8ml抗凝血留测NF-κB活性。血脂等生化指标由本院检验科检测。
1.2.2 T淋巴细胞的分离 另8ml抗凝血缓加于等体积的淋巴分离液上，以2500r/min离 心25min，吸出试管中间的一层乳白色的液体，加入等体积的磷酸缓冲液稀释液洗涤，2500r /min离心10min，弃上清液，加入4%甲醛固定。
1.2.3 NF-κB的免疫组织化学染色 取T淋巴细胞用石蜡包埋并切片，一抗选用兔抗NF- κB p65亚单位的多克隆抗体(美国NeoMarkers公司产品)，用SABC法试剂盒，DAB显色试剂( 深圳晶美生物工程公司)进行操作，操作步骤按试剂盒说明书进行。每张石蜡切片随机选取5 个高倍视野，共计数500个细胞，计算胞核阳性的细胞数占细胞总数的百分比。
1.3 统计学处理：采用SPSS10.0统计软件。计量资料以均数±标准差表示，两组均数间 的比较用Bonferroni方法，相关指标间的相关性采用直线相关分析法，P＜0.05为有显 著性差异。
2 结果
2.1 各组外周血单核细胞NF-κB胞核染色阳性细胞百分比(%)和血浆sICAM-1浓度的变化： (表1)ACS组NF-κB活性和sICAM-1浓度显著高于对照组(P＜0.01)，同时也高于SCHD组 (P＜0.05)，而SCHD组NF-κB活性和sICAM-1浓度略高于对照组，但无统计学意义(均 P＞0.05)。
2.2 外周血单核细胞NF-κB活性与血浆sICAM-1水平的相关性：对NF-κB活性与sICAM-1水 平进行线性相关分析，结果发现NF-κB活性与sICAM-1水平呈显著性相关(P＜0.01)。
3 讨论
近年的研究表明，急性冠状动脉综合征(ACS)的主要发病机制，可能与炎性反应激活所致的 冠状动脉粥样硬化斑块破裂及伴随附壁血栓密切相关［2］，而炎症是导致斑块不稳 定的主要因素。因此通过寻找能反应不稳定性斑块特点的敏感特异性标志尤其是血清学指标 ，可以达到早期预测ACS事件的发生已成为当今的研究的热点。
核因子-κB可能参与了动脉粥样硬化(AS)的发生和发展［3］。NF-κB是一种广泛存 在的核转录因子，活化状态的NF-κB能与其靶基因的特异性κB位点结合，诱导许多参与炎症及免疫的细胞因子、粘附分子、趋化因子及组织因子等的转录，从而影响机体局部或全身性的炎症反应。现已证实［4］NF-κB存在于AS斑块的主要组成细胞即单核细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞中，其活性水平与AS炎性发生、发展的始动过程有关，NF-κB的激活有可能是冠状动脉斑块破裂的启动过程。NF-κB与抑制蛋白ⅠκB结合在胞浆中呈非活化状态。在刺激因子作用下，与ⅠκB解离而活化，并迅速核移位，与特异性κB结合而启动靶基因转录，分泌白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞黏附分子、干扰素等炎症介质，产生急性炎症反应。而各种细胞因子能促进单核／巨核细胞、活性T淋巴细胞及SMC表达基质金属蛋白酶［4］。后者在生理状态下可特异性降解细胞外基质，而由细胞外基质组成的斑块纤维帽对维持斑块稳定起着决定性作用，因而这一作用对斑块的破裂至关重要［5］。在实验中发现外周血白细胞NF-κB的活性明显升高，可能是循环的白细胞接触激活的斑块而被活化，也有可能局部NF-κB的激活促使从斑快中释放，如TNF-a等炎症介质，而使外周白细胞NF-κB的激活。本文发现，与对照组及SCHD组比较，ACS组外周血单核细胞NF-κB活性显著升高，与Ritchie等［4］报道相一致。提示外周血单核细胞NF-κB活性，可能参与了ACS的发生，并在一定程度上反映斑块内炎性反应的程度，是AS斑块不稳定的标志。
综上所述，本文发现ACS组血清sICAM-1水平显著高于SCHD组和正常对照组，相关分析提示外周血单核细胞NF-κB活性与sICAM-1水平显著相关。表明NF-κB主要生物学效应之一是促进炎症介质-血管粘附分子的表达，可能通过上调slCAM-1表达而促发ACS。总之，核因子-κB在ACS的中作用机制及抑制核因子-κB的激活调 控机制有待于进一步分析。由于作者水平和观察的病例有限，尚待作进一步研究。
参考文献
［1］Monaco C， Andreakos E， kiriakidis S，et al． Canonical pathway of
nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflam 2 matory and
prothrombotic responses in human the roscIe rosis［J］． Proc Natl Pcad Sci USA ，2004，101：5634-5639.
［2］Acc／AHA Guideline for the management of patients with unstable angina and
not-st-segment elevation myocardial infarction．A report American college of
cardiology／American heart association task force or practice guidelines［J］． J Am Coil Cardiol，2000，36(5)：970-1062.
［3］Peng Q，Wei Z， Lau BH． Pycnogenol inhibits tumor necrosis factor-alpha-i nduced nuclear factor kappa B activation and adhesion molecule expression in hu man vascular endothelial cells［J］. Cell Mol Life scj，2000，57(5)：834-41.
［4］Ritchie ME. Nuclear factor-κB is selectively and markedly activated in hum ans with unstable angina pectoris［J］. Circulation, 1998, 98(17):1707-1713.
［5］Darvies MJ. Reactive oxygen species, metalloproteinases, and plaquestabilit y［J］. Circulation, 1998, 97(24):2382-2383.
注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
［关键词］ 急性冠状动脉综合征；核因子-κB；可溶性细胞间黏附分 子-1
中图分类号：R541.4
文献标识 码：A
文章编号：1009-816X(2007)02-0299-03
The Clinical Significance of Changes of the Activity of Peripheral Bl ood Mononuclear Cell NF-κB in Acute Coronary Syndrome. TANG Xiao-fan g, WANG Qiang, WANG Yin. Zhejiang Hospital, Zhejiang 310013, China
［Abstract］ Objective To investigate the clinical significance of changes of the activity of peripheral blood mononuclear cell NF-κB in acute coronary syndrome (ACS). Methods Enzyme-linked immunosorbent ass ay was used to measure the plasma soluble intercellular adhesion molecule-1 (sIC AM-1) and immunohistochemical method was used to measure activity of NF-κB in p e ripheral blood mononuclear cell in 58 patients with ACS, 48 stable coronary hear t disease (SCHD) and 30 normal control subjects. At the same time linear correl ation analysis was used to analyze the correlation between the level of sICAM-1 and the level of activity of NF-κB. Results The level of activi ty of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells and the plasma sICAM-1 cocent ration were significantly higher in patients with ACS than in the controls and i n patients with SCHD. The level of plasma sICAM-1 was positively correlated with activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells. There was no signific ant difference in levels of activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear c ell and the plasma sICAM-1 concentration between the controls and the patients w ith SCHD. Conclusions The activity of NF-κB in peripheral blood mononuclear cells is significantly elevated in ACS. It is a potential marker of plaque unstability and may induce ACS via up-regulating sICAM-1 expression.
［Key words］ Acute coronary syndrome; Activity of NF-κB; Plasm a soluble intercellular adhesion molecule-1
近来，随着对急性冠状动脉综合征(ACS)研究的不断深入，发现炎症在ACS的发病机制中起着 重要作用，而核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB NF-κB)作为一种炎症反应调 节因子，一直被认为是一种主要的冠状动脉粥样硬化发生发展的因子［1］。本研究 分别采用夹心酶联免疫吸附法和免疫组织化学染色法测定54例ACS，42例稳定性冠心病(SCHD )患者及36例对照组的外周血单核细胞NF-κB活性及血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1) 水平。旨在探讨ACS患者单核细胞NF-κB活性的变化及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选择2005年5月至2006年9月在本院心内科门诊或住院的冠心病(CHD)患者9 6例，其中男57例，女39例，年龄39～78岁，平均年龄54.5±9.1岁。CHD患者分为二个亚 组，即ACS组54例，包括急性心肌梗死(AMI)患者25例，不稳定性心绞痛(UAP)患者29例；SCH D组42例。对照组为同期来本院参加体检者：无CHD病史，心电图检查无缺血性改变。其中男 21例，女15例，年龄41～76岁，平均年龄57.8±9.3岁。
另外，所有研究对象必须排除合并未控制的高血压、合并感染性疾病，甲状腺疾病，风湿性 疾病、肿瘤、全身免疫性疾病、严重肝肾功能不全、糖尿病、高热及应用炎症抑制药物如非 固醇类消炎镇痛药、类固醇和鸦片类药等，均予剔除。两组间年龄、性别、吸烟史、血压 、体重指数比较，无显著性差异(P＞0.05)。
1.2 方法：
1.2.1 所有研究对象均于门诊当日或入院次日采集空腹肝素抗凝静脉血10ml，分成2ml和 8ml两部分，2ml抗凝血摇匀，3500r/min离心5min，取上清液保存于-70℃冰箱待测。采用夹 心酶联免疫吸附测定法测定sICAM-1，其试剂盒为奥地利Bender公司产品，严格按说明书 操作。另8ml抗凝血留测NF-κB活性。血脂等生化指标由本院检验科检测。
1.2.2 T淋巴细胞的分离 另8ml抗凝血缓加于等体积的淋巴分离液上，以2500r/min离 心25min，吸出试管中间的一层乳白色的液体，加入等体积的磷酸缓冲液稀释液洗涤，2500r /min离心10min，弃上清液，加入4%甲醛固定。
1.2.3 NF-κB的免疫组织化学染色 取T淋巴细胞用石蜡包埋并切片，一抗选用兔抗NF- κB p65亚单位的多克隆抗体(美国NeoMarkers公司产品)，用SABC法试剂盒，DAB显色试剂( 深圳晶美生物工程公司)进行操作，操作步骤按试剂盒说明书进行。每张石蜡切片随机选取5 个高倍视野，共计数500个细胞，计算胞核阳性的细胞数占细胞总数的百分比。
1.3 统计学处理：采用SPSS10.0统计软件。计量资料以均数±标准差表示，两组均数间 的比较用Bonferroni方法，相关指标间的相关性采用直线相关分析法，P＜0.05为有显 著性差异。
2 结果
2.1 各组外周血单核细胞NF-κB胞核染色阳性细胞百分比(%)和血浆sICAM-1浓度的变化： (表1)ACS组NF-κB活性和sICAM-1浓度显著高于对照组(P＜0.01)，同时也高于SCHD组 (P＜0.05)，而SCHD组NF-κB活性和sICAM-1浓度略高于对照组，但无统计学意义(均 P＞0.05)。
2.2 外周血单核细胞NF-κB活性与血浆sICAM-1水平的相关性：对NF-κB活性与sICAM-1水 平进行线性相关分析，结果发现NF-κB活性与sICAM-1水平呈显著性相关(P＜0.01)。
3 讨论
近年的研究表明，急性冠状动脉综合征(ACS)的主要发病机制，可能与炎性反应激活所致的 冠状动脉粥样硬化斑块破裂及伴随附壁血栓密切相关［2］，而炎症是导致斑块不稳 定的主要因素。因此通过寻找能反应不稳定性斑块特点的敏感特异性标志尤其是血清学指标 ，可以达到早期预测ACS事件的发生已成为当今的研究的热点。
核因子-κB可能参与了动脉粥样硬化(AS)的发生和发展［3］。NF-κB是一种广泛存 在的核转录因子，活化状态的NF-κB能与其靶基因的特异性κB位点结合，诱导许多参与炎症及免疫的细胞因子、粘附分子、趋化因子及组织因子等的转录，从而影响机体局部或全身性的炎症反应。现已证实［4］NF-κB存在于AS斑块的主要组成细胞即单核细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞中，其活性水平与AS炎性发生、发展的始动过程有关，NF-κB的激活有可能是冠状动脉斑块破裂的启动过程。NF-κB与抑制蛋白ⅠκB结合在胞浆中呈非活化状态。在刺激因子作用下，与ⅠκB解离而活化，并迅速核移位，与特异性κB结合而启动靶基因转录，分泌白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞黏附分子、干扰素等炎症介质，产生急性炎症反应。而各种细胞因子能促进单核／巨核细胞、活性T淋巴细胞及SMC表达基质金属蛋白酶［4］。后者在生理状态下可特异性降解细胞外基质，而由细胞外基质组成的斑块纤维帽对维持斑块稳定起着决定性作用，因而这一作用对斑块的破裂至关重要［5］。在实验中发现外周血白细胞NF-κB的活性明显升高，可能是循环的白细胞接触激活的斑块而被活化，也有可能局部NF-κB的激活促使从斑快中释放，如TNF-a等炎症介质，而使外周白细胞NF-κB的激活。本文发现，与对照组及SCHD组比较，ACS组外周血单核细胞NF-κB活性显著升高，与Ritchie等［4］报道相一致。提示外周血单核细胞NF-κB活性，可能参与了ACS的发生，并在一定程度上反映斑块内炎性反应的程度，是AS斑块不稳定的标志。
综上所述，本文发现ACS组血清sICAM-1水平显著高于SCHD组和正常对照组，相关分析提示外周血单核细胞NF-κB活性与sICAM-1水平显著相关。表明NF-κB主要生物学效应之一是促进炎症介质-血管粘附分子的表达，可能通过上调slCAM-1表达而促发ACS。总之，核因子-κB在ACS的中作用机制及抑制核因子-κB的激活调 控机制有待于进一步分析。由于作者水平和观察的病例有限，尚待作进一步研究。
参考文献
［1］Monaco C， Andreakos E， kiriakidis S，et al． Canonical pathway of
nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflam 2 matory and
prothrombotic responses in human the roscIe rosis［J］． Proc Natl Pcad Sci USA ，2004，101：5634-5639.
［2］Acc／AHA Guideline for the management of patients with unstable angina and
not-st-segment elevation myocardial infarction．A report American college of
cardiology／American heart association task force or practice guidelines［J］． J Am Coil Cardiol，2000，36(5)：970-1062.
［3］Peng Q，Wei Z， Lau BH． Pycnogenol inhibits tumor necrosis factor-alpha-i nduced nuclear factor kappa B activation and adhesion molecule expression in hu man vascular endothelial cells［J］. Cell Mol Life scj，2000，57(5)：834-41.
［4］Ritchie ME. Nuclear factor-κB is selectively and markedly activated in hum ans with unstable angina pectoris［J］. Circulation, 1998, 98(17):1707-1713.
［5］Darvies MJ. Reactive oxygen species, metalloproteinases, and plaquestabilit y［J］. Circulation, 1998, 97(24):2382-2383.
注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文