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基金项目：黑龙江省卫生厅课题（No.2007-492）
通讯作者：马萍，女，副教授，研究方向：神经康复
摘要：
目的：探讨NT-3与糖尿病性阴茎勃起功能障碍（DED）的关系，电针治疗对其表达变化的影响及改善勃起功能的可能机制。方法：取糖尿病大鼠20只，8周后注射APO 30min内未有勃起的随机均分为电针组（EA）及模型组（DM），EA电针足三里、百会、会阴穴4周，另取正常大鼠10只做正常对照组（CN），通过免疫组化观察各组脊髓腰骶段NT-3阳性神经元表达的变化。结果：EA及DM与CN相比、EA与DM相比，大鼠阴茎勃起次数及脊髓腰骶段NT-3阳性神经细胞表达均有显著性差异（P<0.05；P<0.01）。结论：电针治疗可明显提高DED大鼠阴茎勃起次数，这可能与提高腰骶段脊髓NT-3阳性神经元表达有关。
关键词：电针；糖尿病；神经生长因子-3；勃起功能障碍
【中图分类号】
R587.1 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）06-0071-01
阴茎勃起功能障碍（ED）是糖尿病（DM）的常见并发症，占男性勃起障碍发病率的35%～75%左右，严重危害男性生活质量，但其发病的分子机制仍未完全阐明。
本实验通过应用免疫组化技术对DED大鼠模型腰骶段脊髓NT-3表达的变化进行观察，以探讨NT-3与DED的关系和发生机制，并通过电针治疗观察其对DED的改善和对NT-3表达变化的影响，进一步完善电针治疗DED的可能分子机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物：
选用Wistar雄性大鼠30只，体重200-250g，购自本校实验动物中心，合格证号：黑动字第P00102009号。
1.2 实验方法
1.2.1 模型制作：
随机抽取10只为正常对照组，其余20只用于糖尿病造模，在禁食24 h后按60 mg/kg腹腔注射2%链脲佐菌素溶液。1周后测定血糖，凡血糖值≥16.7 mmol/L者为糖尿病大鼠。
电针取穴参照《实验针灸学》[1]，每次电针15min，隔日1次，连续4周。
1.2.2 APO试验：
于8周2个时间点进行ED实验，每个时间点为10只。参照Heaton方法，注射阿扑吗啡（APO）（100μg/100g）后观察30 min，记录阴茎勃起次数。龟头充血及末端阴茎露出为勃起1次。30 min内未出现勃起的为模型组。
1.2.2 标本制备：
取腰骶段脊髓放入4%多聚甲醛固定2 h，再入20%蔗糖至下沉；用低温冰冻切片机对脊髓作连续横切片，片厚30μm。切片进行NT-3的ABC免疫组织化学染色。
1.2.3 图像分析及数据统计：
数据用表示， 用Tiger920图像分析系统及Tanon GIS-1000凝胶成像处理系统测定大鼠腰骶段脊髓NT-3蛋白的相对含量。显著性检验采用SPSS11.0软件，组间差异用方差分析作统计学处理。
2 实验分析及结果
2.1 阴茎勃起功能实验及NT-3免疫组化染色结果： 与CN比较，EA及DM阴茎勃起次数和勃起率明显降低（P<0. 05），尤其是DM（P<0. 01）；EA与DM比较， 阴茎勃起次数和勃起率明显增强（P<0. 05）。
腰骶段脊髓存在大量NT-3阳性神经细胞，EA、DM与CN相比，NT-3阳性神经细胞的数量及灰度差异均有显著性（P<0. 05；P<0. 01） ；EA与DM相比，NT-3阳性神经细胞的数量及灰度差异有显著性（P<0. 05） 。
表1 各组大鼠阴茎勃起次数及腰骶段脊髓NT-3阳性神经纤维灰度比较（X±s）
与CN比较，*P<0. 05，**P<0. 01 EA与DM比较， ▲ P<0. 05
3 讨论
神经营养因子是一类在靶组织内合成，并逆行运输至效应神经元的能对中枢和周围神经发挥营养作用的小分子肽类物质和蛋白质。NT-3是神经营养因子家族中重要成员，它与NGF有50%同源性，对中枢和周围神经系统均有广泛作用。
神经因素在阴茎勃起的发生及调控中起重要作用，糖尿病引起的神经病变是DED发病的重要原因。自主神经病变可以引起阴茎静脉漏的形成， 而周围神经病变可以使神经反射传导障碍，支配阴茎的舒血管肠肽能、胆碱能、肾上腺素能神经损坏，导致与阴茎勃起有关的神经递质浓度改变，最终导致ED。
李剑波等[2]通过定量分析大鼠坐骨神经的结构，观察DM状态对外周神经的损害，发现DM状态可致大鼠坐骨神经髓鞘及轴突的改变，包括：轴索萎缩、脱髓鞘、有髓纤维密度减少即神经再生障碍。对勃起功能起不同的作用。
芬兰学者Hiltunen等报道，在正常大鼠脊髓S1段背根神经节，NT-3、NGF、BDNF 3种NT的受体均有表达。该研究结果推测，NT-3可能为勃起过程中更为重要的NT。
褚氏认为[3]，会阴穴治疗阳瘘，能够改善局部血管、神经机能，可能与“阴部神经-脊神经节段反射弧”作用的调整及其对勃起的影响有关。
脊髓勃起中枢位于T12-L1.节段，反射性勃起中枢位于S2-S4节段，我们通过对大鼠的腰骶段脊髓NT-3的研究，发现在正常大鼠腰骶段脊髓有NT-3阳性神经细胞的表达，DM大鼠腰骶段脊髓NT-3阳性神经细胞明显减少（P<0. 01），将直接影响中枢系统腰骶段脊髓的功能。 男性生殖器官都接受交感神经支配，前列腺的交感神经来自腰1- 3交感干神经节，阴茎的交感神经形成阴茎海绵体大、小神经，分布于尿道海绵体部、阴茎海绵体部及其勃起组织，是调节阴茎勃起主要神经。NT-3在大鼠腰骶段脊髓中表达下降，将直接影响阴茎及前列腺内神经的病变，将引起阴茎勃起障碍及主要附属性腺对性功能的维护作用，引起ED。通过电针足三里、关元、会阴穴，明显提高ED大鼠腰骶段脊髓内NT-3的表达，明显改善了勃起功能，这可能为电针治疗糖尿病勃起功能障碍提供新的理论依据。
参考文献
[1] 邓春雷，殷克敬.实验针灸学[M].北京：人民卫生出版社， 1998， 7： 147.
[2] 李剑波，陈家伟，冯振卿，等. 糖尿病对外周神经形态结构的影响[J]. 南京医科大学学报，1999，19（3）： 200-202.
[3] 褚自宏. 会阴配关元治疗阳瘘症31例[J]. 针灸临床杂志，1993，9（1）：15.
通讯作者：马萍，女，副教授，研究方向：神经康复
摘要：
目的：探讨NT-3与糖尿病性阴茎勃起功能障碍（DED）的关系，电针治疗对其表达变化的影响及改善勃起功能的可能机制。方法：取糖尿病大鼠20只，8周后注射APO 30min内未有勃起的随机均分为电针组（EA）及模型组（DM），EA电针足三里、百会、会阴穴4周，另取正常大鼠10只做正常对照组（CN），通过免疫组化观察各组脊髓腰骶段NT-3阳性神经元表达的变化。结果：EA及DM与CN相比、EA与DM相比，大鼠阴茎勃起次数及脊髓腰骶段NT-3阳性神经细胞表达均有显著性差异（P<0.05；P<0.01）。结论：电针治疗可明显提高DED大鼠阴茎勃起次数，这可能与提高腰骶段脊髓NT-3阳性神经元表达有关。
关键词：电针；糖尿病；神经生长因子-3；勃起功能障碍
【中图分类号】
R587.1 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）06-0071-01
阴茎勃起功能障碍（ED）是糖尿病（DM）的常见并发症，占男性勃起障碍发病率的35%～75%左右，严重危害男性生活质量，但其发病的分子机制仍未完全阐明。
本实验通过应用免疫组化技术对DED大鼠模型腰骶段脊髓NT-3表达的变化进行观察，以探讨NT-3与DED的关系和发生机制，并通过电针治疗观察其对DED的改善和对NT-3表达变化的影响，进一步完善电针治疗DED的可能分子机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物：
选用Wistar雄性大鼠30只，体重200-250g，购自本校实验动物中心，合格证号：黑动字第P00102009号。
1.2 实验方法
1.2.1 模型制作：
随机抽取10只为正常对照组，其余20只用于糖尿病造模，在禁食24 h后按60 mg/kg腹腔注射2%链脲佐菌素溶液。1周后测定血糖，凡血糖值≥16.7 mmol/L者为糖尿病大鼠。
电针取穴参照《实验针灸学》[1]，每次电针15min，隔日1次，连续4周。
1.2.2 APO试验：
于8周2个时间点进行ED实验，每个时间点为10只。参照Heaton方法，注射阿扑吗啡（APO）（100μg/100g）后观察30 min，记录阴茎勃起次数。龟头充血及末端阴茎露出为勃起1次。30 min内未出现勃起的为模型组。
1.2.2 标本制备：
取腰骶段脊髓放入4%多聚甲醛固定2 h，再入20%蔗糖至下沉；用低温冰冻切片机对脊髓作连续横切片，片厚30μm。切片进行NT-3的ABC免疫组织化学染色。
1.2.3 图像分析及数据统计：
数据用表示， 用Tiger920图像分析系统及Tanon GIS-1000凝胶成像处理系统测定大鼠腰骶段脊髓NT-3蛋白的相对含量。显著性检验采用SPSS11.0软件，组间差异用方差分析作统计学处理。
2 实验分析及结果
2.1 阴茎勃起功能实验及NT-3免疫组化染色结果： 与CN比较，EA及DM阴茎勃起次数和勃起率明显降低（P<0. 05），尤其是DM（P<0. 01）；EA与DM比较， 阴茎勃起次数和勃起率明显增强（P<0. 05）。
腰骶段脊髓存在大量NT-3阳性神经细胞，EA、DM与CN相比，NT-3阳性神经细胞的数量及灰度差异均有显著性（P<0. 05；P<0. 01） ；EA与DM相比，NT-3阳性神经细胞的数量及灰度差异有显著性（P<0. 05） 。
表1 各组大鼠阴茎勃起次数及腰骶段脊髓NT-3阳性神经纤维灰度比较（X±s）
与CN比较，*P<0. 05，**P<0. 01 EA与DM比较， ▲ P<0. 05
3 讨论
神经营养因子是一类在靶组织内合成，并逆行运输至效应神经元的能对中枢和周围神经发挥营养作用的小分子肽类物质和蛋白质。NT-3是神经营养因子家族中重要成员，它与NGF有50%同源性，对中枢和周围神经系统均有广泛作用。
神经因素在阴茎勃起的发生及调控中起重要作用，糖尿病引起的神经病变是DED发病的重要原因。自主神经病变可以引起阴茎静脉漏的形成， 而周围神经病变可以使神经反射传导障碍，支配阴茎的舒血管肠肽能、胆碱能、肾上腺素能神经损坏，导致与阴茎勃起有关的神经递质浓度改变，最终导致ED。
李剑波等[2]通过定量分析大鼠坐骨神经的结构，观察DM状态对外周神经的损害，发现DM状态可致大鼠坐骨神经髓鞘及轴突的改变，包括：轴索萎缩、脱髓鞘、有髓纤维密度减少即神经再生障碍。对勃起功能起不同的作用。
芬兰学者Hiltunen等报道，在正常大鼠脊髓S1段背根神经节，NT-3、NGF、BDNF 3种NT的受体均有表达。该研究结果推测，NT-3可能为勃起过程中更为重要的NT。
褚氏认为[3]，会阴穴治疗阳瘘，能够改善局部血管、神经机能，可能与“阴部神经-脊神经节段反射弧”作用的调整及其对勃起的影响有关。
脊髓勃起中枢位于T12-L1.节段，反射性勃起中枢位于S2-S4节段，我们通过对大鼠的腰骶段脊髓NT-3的研究，发现在正常大鼠腰骶段脊髓有NT-3阳性神经细胞的表达，DM大鼠腰骶段脊髓NT-3阳性神经细胞明显减少（P<0. 01），将直接影响中枢系统腰骶段脊髓的功能。 男性生殖器官都接受交感神经支配，前列腺的交感神经来自腰1- 3交感干神经节，阴茎的交感神经形成阴茎海绵体大、小神经，分布于尿道海绵体部、阴茎海绵体部及其勃起组织，是调节阴茎勃起主要神经。NT-3在大鼠腰骶段脊髓中表达下降，将直接影响阴茎及前列腺内神经的病变，将引起阴茎勃起障碍及主要附属性腺对性功能的维护作用，引起ED。通过电针足三里、关元、会阴穴，明显提高ED大鼠腰骶段脊髓内NT-3的表达，明显改善了勃起功能，这可能为电针治疗糖尿病勃起功能障碍提供新的理论依据。
参考文献
[1] 邓春雷，殷克敬.实验针灸学[M].北京：人民卫生出版社， 1998， 7： 147.
[2] 李剑波，陈家伟，冯振卿，等. 糖尿病对外周神经形态结构的影响[J]. 南京医科大学学报，1999，19（3）： 200-202.
[3] 褚自宏. 会阴配关元治疗阳瘘症31例[J]. 针灸临床杂志，1993，9（1）：15.