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摘 要：通过对工程菌培养条件进行优化，结果表明最佳的表达条件：接种量4%和5%，37℃，200r/min，培养至OD600为0.7时，向培养基中加入0.5mol/L IPTG，培养5h。
关键词：胶原蛋白多肽；大肠杆菌；表达
中图分类号：Q5 文献标识码：A 文章编号：1009-914x（2014）02-01-01
胶原蛋白多肽是通过对胶原蛋白链酶法水解，然后进行提取，变成可溶解性的水解胶原蛋白，是片段的。在胶原蛋白的研究中，对胶原蛋白多肽的研究已经成为一个重要领域。在胶原蛋白的众多类型中，Ⅵ型胶原蛋白（CⅥ）几乎分布在所有的结缔组织中，而且它还具有维持组织完整性，能促进增殖和抗凋亡，促进细胞迁移，刺激DNA合成，具有生长因子样的特性。目前还有研究报道证明Ⅵ型胶原蛋白亚单位的基因的突变是导致Bethlem肌病的主要原因，而且Ⅵ型胶原蛋白大量沉积能导致肝纤维化，Ⅵ型胶原蛋白还对细胞增殖和肿瘤转化方面具有一定作用。我们利用分子生物学手段，构建含有人的六型人胶原蛋白多肽基因的原核表达载体，并将其转化到大肠杆菌中进行表达研究[1-4]。
1 材料与方法
1.1 菌种与质粒
含有质粒的大肠杆菌DH5α：为吉林农业大学生物物理实验室保存。
1.2 方法
从鉴定后的转化平板上挑取单菌落到5 mL LB液体培养基，37℃培养至OD600为0.7，然后根据不同的IPTG浓度、培养条件以及诱导时间等参数，筛选最佳的培养条件和诱导条件，以含有空白载体的菌株同样培养作为空白对照。
2 结果与分析
2.1不同接种量对重组蛋白表达的影响
2.2 IPTG浓度对重组蛋白表达量的影响
3 结 论
本研究是利用基因工程的方法对人Ⅵ型胶原蛋白的多肽进行重组表达，并对胶原性多肽在原核细胞中的表达条件进行了初步探索。本研究对不同的培养条件对重组蛋白表达量的影响做了相应的摸索研究，结果表明，接种量对重组蛋白的影响显著，当接种量过大时，就会直接影响菌体生长状态，影响重组蛋白的表达；溶氧量过小会导致菌体生长不足，从而影响重组蛋白的表达；ITPG的浓度对重组蛋白表达率的影响不大，我们考虑到ITPG的毒性和生产成本，最终我们选用0.5mol/L；IPTG最佳添加时间为OD值为0.6-07；IPTG诱导时间为5小时。
参考文献：
[1] 吴铭.重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达及其生物活性研究[D].吉林农业大学.2011
[2] 徐珍珍. 人胶原蛋白原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[D]. 吉林农业大学.2011
[3] 吴铭，重组人胶原蛋白肽的表达及纯化工艺的优化[J]，湖北农业科学，2011，Vol.50：2768-2770.
[4] 尹利端， 石丽花， 王立志等. 水解胶原蛋白在保健食品和化妆品中的应用[J]. 农业工程技术（农产品加工）， 2007， 10： 17-20.
[5] 陈光；吴铭；王刚等，重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达[J]. 吉林大学学报（医学版），2011，Vol.37：656-660.
[6] Yao J， Yanagisawa S， Asakura T. Design Expression and Characterization of Collagen-Like Proteins Based on the Cell Adhesive and Crosslinking Sequences Derived from Native Collagens[J]. The Journal of Biochemistry， 2004， 136（5）： 643-649.
关键词：胶原蛋白多肽；大肠杆菌；表达
中图分类号：Q5 文献标识码：A 文章编号：1009-914x（2014）02-01-01
胶原蛋白多肽是通过对胶原蛋白链酶法水解，然后进行提取，变成可溶解性的水解胶原蛋白，是片段的。在胶原蛋白的研究中，对胶原蛋白多肽的研究已经成为一个重要领域。在胶原蛋白的众多类型中，Ⅵ型胶原蛋白（CⅥ）几乎分布在所有的结缔组织中，而且它还具有维持组织完整性，能促进增殖和抗凋亡，促进细胞迁移，刺激DNA合成，具有生长因子样的特性。目前还有研究报道证明Ⅵ型胶原蛋白亚单位的基因的突变是导致Bethlem肌病的主要原因，而且Ⅵ型胶原蛋白大量沉积能导致肝纤维化，Ⅵ型胶原蛋白还对细胞增殖和肿瘤转化方面具有一定作用。我们利用分子生物学手段，构建含有人的六型人胶原蛋白多肽基因的原核表达载体，并将其转化到大肠杆菌中进行表达研究[1-4]。
1 材料与方法
1.1 菌种与质粒
含有质粒的大肠杆菌DH5α：为吉林农业大学生物物理实验室保存。
1.2 方法
从鉴定后的转化平板上挑取单菌落到5 mL LB液体培养基，37℃培养至OD600为0.7，然后根据不同的IPTG浓度、培养条件以及诱导时间等参数，筛选最佳的培养条件和诱导条件，以含有空白载体的菌株同样培养作为空白对照。
2 结果与分析
2.1不同接种量对重组蛋白表达的影响
2.2 IPTG浓度对重组蛋白表达量的影响
3 结 论
本研究是利用基因工程的方法对人Ⅵ型胶原蛋白的多肽进行重组表达，并对胶原性多肽在原核细胞中的表达条件进行了初步探索。本研究对不同的培养条件对重组蛋白表达量的影响做了相应的摸索研究，结果表明，接种量对重组蛋白的影响显著，当接种量过大时，就会直接影响菌体生长状态，影响重组蛋白的表达；溶氧量过小会导致菌体生长不足，从而影响重组蛋白的表达；ITPG的浓度对重组蛋白表达率的影响不大，我们考虑到ITPG的毒性和生产成本，最终我们选用0.5mol/L；IPTG最佳添加时间为OD值为0.6-07；IPTG诱导时间为5小时。
参考文献：
[1] 吴铭.重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达及其生物活性研究[D].吉林农业大学.2011
[2] 徐珍珍. 人胶原蛋白原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[D]. 吉林农业大学.2011
[3] 吴铭，重组人胶原蛋白肽的表达及纯化工艺的优化[J]，湖北农业科学，2011，Vol.50：2768-2770.
[4] 尹利端， 石丽花， 王立志等. 水解胶原蛋白在保健食品和化妆品中的应用[J]. 农业工程技术（农产品加工）， 2007， 10： 17-20.
[5] 陈光；吴铭；王刚等，重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达[J]. 吉林大学学报（医学版），2011，Vol.37：656-660.
[6] Yao J， Yanagisawa S， Asakura T. Design Expression and Characterization of Collagen-Like Proteins Based on the Cell Adhesive and Crosslinking Sequences Derived from Native Collagens[J]. The Journal of Biochemistry， 2004， 136（5）： 643-649.