观察RNA干扰BAG-1基因表达对肝癌细胞增殖凋亡及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。
方法以人正常肝癌细胞L02作为对照细胞，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分别检测BAG-1在无转移能力的HepG2、Huh7人肝癌细胞株及转染潜能依次增高的MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3人肝癌细胞株中的表达；将阴性小干扰RNA(siRNA)和BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞，不转染的细胞为空白对照组，转染48 h后检测转染效果；分别于转染后的24、48、72 h通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖；流式细胞仪检测转染48 h细胞的凋亡；Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、生存素(Survivin)、c-Myc的蛋白表达。
结果BAG-1在肝癌细胞中的表达均显著高于对照细胞L02(mRNA表达：PHepG2＝0.000；PHuh7＝0.000；PMHCC97L＝0.000；PMHCC97H＝0.000；PHCCLM3＝0.000；蛋白表达：PHepG2＝0.030；PHuh7＝0.001；PMHCC97L＝0.000；PMHCC97H＝0.000；PHCCLM3＝0.000)；BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞后BAG-1的蛋白表达(0.097±0.010)显著低于空白对照组(0.489±0.039)(P＝0.000)；BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞48 h(0.312±0.024)和72 h(0.398±0.036)后细胞的增殖显著低于空白对照组(0.448±0.032)、(0.673±0.051)(P48 h＝0.004；P72 h＝0.002)；与空白对照组(2.13±0.11)%、(0.512±0.048)、(0.349±0.032)、(0.166±0.015)比较，BAG-1-siRNA组细胞凋亡率[(13.47±1.05)%]显著升高，β-catenin(0.247±0.028)、Survivin(0.153±0.017)、c-Myc(0.089±0.009)蛋白显著下调表达(Pβ-catenin＝0.001；PSurvivin＝0.001；Pc-Myc＝0.002)。
结论抑制BAG-1表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡。