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目的
建立并评价Sanger测序技术在诊断运动神经元存活基因1(SMN1)复合杂合突变型脊髓性肌萎缩症(SMA)病例中的意义。
方法选取首都儿科研究所2014年1月至2016年6月就诊的52例SMA患儿，应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增52例患儿的SMN1和SMN2基因第7外显子，Sanger测序通过识别扩增片段中SMN1和SMN2基因固有差异碱基的峰高，判断SMN1基因纯合或杂合缺失。当SMN1基因杂合缺失时，经PCR-Sanger测序筛查SMN基因所有外显子、外显子与内含子交界区域的变异位点。最后通过多重连接探针扩增(MLPA)方法验证SMN1基因杂合缺失，并利用克隆测序确定突变点来自SMN1基因，完成SMN1基因复合杂合突变的确诊。
结果经Sanger测序检测的52例SMA患儿中47例为SMN1基因纯合缺失，5例为SMN1基因杂合缺失。MLPA方法验证了后5例患儿SMN1基因拷贝数均为1，Sanger测序检测出5例患儿均存在SMN基因点突变，并通过克隆Sanger测序验证了5例患儿突变均位于SMN1基因。
结论Sanger测序技术适用于SMN1基因复合杂合突变病例的诊断，对提高SMA基因诊断率具有临床意义。