目的采用高速逆流色谱技术(HSCCC)及超高压液相色谱-高分辨线性离子阱-轨道阱杂交串联质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MSn)快速分离鉴定防风中四种色原酮类化合物,建立快速分离制备色原酮类化合物的方法。方法采用甲醇加热回流提取得防风提取物,再用正丁醇萃取富集色原酮类成分;采用高速逆流色谱分离纯化,以乙酸乙酯:正丁醇:水(1:1:3,V/V/V)组成二元溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为800 r/min,流动相流速为1.5 ml/min,检测波长254 nm。结果从100 mg防风正丁醇提取物中一次性分离制备得到3.58 mg升麻素苷,3.72 mg 5-O-甲基维斯阿米醇苷,0.96 mg亥茅酚苷,7.8 mg升麻素,经高效液相色谱法(HPLC)分析,其纯度分别为95.28%,97.89%,59.88%和92.33%,超高压液相色谱-高分辨线性离子阱-轨道阱杂交串联质谱技术鉴定化合物1为升麻素苷,化合物2为5-O-甲基维斯阿米醇苷,化合物3为亥茅酚苷,化合物4为升麻素。结论该联用方法操作简便、灵敏度高、重现性好,为色原酮类化合物的开发提供了理论基础和技术平台。