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采用紫外诱变和梯度平板法筛选出耐底物的突变株，通过单因素实验考察发酵液起始pH值、装液量、发酵周期、接种量对产酶的影响，确定最佳的发酵条件；采用均匀设计实验优化发酵培养基。筛选出．株能耐受4％丙烯腈的腈水合酶产生菌，在最佳产酶条件下，耐底物突变株的腈水合酶酶活达到11．5MU／mL，与优化前相比，酶活提高了49．35％。腈水合酶耐底物突变株的最佳发酵条件为：初始pH7．0、装液量16％、发酵周期58h、接种量10％。最佳发酵培养基配方为：ρ（葡萄糖）=26g／L，ρ（酵母膏）=2g／L，ρ（尿素）=4g／