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目的观察丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)体外长期存活状态下是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在及其不同时期高变区基因序列的变化.方法用EB病毒感染并使HCV阳性PBMC转化,获得HCV的外周血永生化B细胞(LCL).而后,每个月应用逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-net-PCR)检测1次培养细胞和上清液中的HCV RNA,并用原位RT-net-PCR观察HCVRNA在细胞中存在的部位;应用基因测序技术分析LCL传代培养1个月和9个月后HCV高变区(HVR)核苷酸序列,并以原患者半年后血清作对照.结果经连续1年检测,HCV在传代细胞中持续存在,培养细胞中的HCV RNA负链和培养上清液中的HCV呈间断阳性;原位PCR发现HCVRNA阳性信号弥散性、簇状和团块状分布于胞浆中,细胞膜、核膜和细胞核阴性;患者血清HCV核苷酸变异集中在第1491～1583位核苷酸(即384～414位氨基酸)和第1761～1781位核苷酸(即473～479位氨基酸)两个区域,而LCL传代培养1个月和9个月后细胞中HCV HVR核苷酸同源性为99.37%.结论HCV可以在LCL中较长时间存在,而HVR基因序列无明显变化.